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文献和实验细胞。此外,还含有血小板。 (5)去除部分上层液体,余下约 1 mL,用移液器插到云雾层,吸取单个核细胞。置入另一离心管中,加入 5 倍以上体积的 PBS,离心 300 g×10 分钟,洗涤细胞两次。 (6)末次离心后,弃上清,加入红细胞裂解液,室温孵育 2 分钟,裂解红细胞,可根据情况适当增减时间。 (7)加入 10 mLPBS,离心 300 g×10 分钟,洗涤细胞两次。 (8)末次离心后,弃上清,加入含有 10%FBS 的 RPMI1640,重悬细胞,计数,计算细胞活力。 注意事项 全血溶液可以加在
流式课堂 | 裂红 or 分离液?外周血不同制备方法应用场景
外周血样本采集完毕后,我们需要对其中的待测单细胞进行提取。针对外周血样本,最常使用的样本制备方法有两种: 一. 裂红法 利用红细胞裂解液,去除红细胞 二. Ficoll 法 利用不同细胞的沉降系数差异,进行梯度密度离心,提取 PBMC 两种方法分别在什么场景下应用?接着往下看。 裂红法 裂红法,即裂解样本中的红细胞。血液中的红细胞比白细胞多 10-100 倍,红细胞数量过多,会影响细胞群体的分析。因此,我们在做血液样本检测时,经常需要裂解红细胞。 裂红前 裂红后 01
科镊子提起腹膜,用 5mL 注射器往小鼠腹腔注射 2.5mL 预冷 PBS(勿扎到脏器),轻揉小鼠腹部1~2 min。注射器回抽腹腔灌洗液,收集于15mL 离心管中。 重复第 5 步 5 次,冲洗腹腔,可观察到冲洗液逐渐澄清。 将收集的腹腔灌洗液 300 g 离心 5 min,弃上清。 用细胞染色缓冲液或者含 10% 胎牛血清的 1640 培养液重悬细胞。 进行细胞计数,并调整细胞浓度至 1×107/mL。 注意事项: 若第 7 步离心弃上清后发现细胞沉淀中有较多红细胞,且检测目的细胞非红细胞,先
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