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- 2025年07月14日
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流式胞内固定破膜缓冲液设计用于细胞内染色和流式细胞术分析，并专门配制用于减少荧光染料标记抗体的非特异性染色和增加荧光信噪比。第一步，可用固定缓冲液“固定”活细胞，该缓冲液可交联蛋白。第二步，使用破膜缓冲液，在膜上造孔，从而使细胞内染色抗体有效进入细胞。应使用破膜缓冲液进行细胞破膜后的后续洗涤步骤、抗体添加和孵育。在运行样品之前使用流式细胞分析染色缓冲液（货号 00-4222）完成最后的洗涤步骤和细胞重悬。该试剂盒常用于对细胞质蛋白以及分泌途径中的蛋白（如趋化因子和细胞因子）进行染色。不建议将其用于核内染色。关于细胞核染色，请参阅 Foxp3/转录因子缓冲液套件（货号 00-5523）。
在固定步骤之前，建议使用一种 Fixable Viability Dye（eFluor™ 450、506、660、780、520 或 455 UV）标记活细胞，然后进行固定。
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文献和实验分钟(1300RPM)，除去上层液体。 17. 加入包括同种型的细胞内抗体，室温孵育40分钟。加入150 μL透性缓冲液，离心去除上层。此过程可以重复一次。 18. 细胞重悬于150 μL PBS-W液体中，离心去除上层。加入200 μL 的2％甲醛溶液并将孔内容物转移至FACS管，避光冷藏储存。 19. 在488nm波长下分析细胞(FACSVantage®流式细胞仪分析细胞，Becton-Dickinson，San Diego，CA，USA
）。免疫荧光显微技术，包括流式细胞仪，对检测细胞表面抗原或完整细胞内某些细胞浆或细胞核抗原很有用。各种方法大致的灵敏度限度列在表31-1。如接下来这部分所描述的那样，各种方法最终都是以检测抗原抗体之间的反应为根据 抗原与抗体的结合作用 抗体（Ab）和抗原(Ag)的交互作用与经典的质量动力反应学描述的双分子反应相似： [Ag]+[Ab] 游离抗原和游离抗体可逆地反应形成抗原-抗体复合物。重排等式可以得到一个亲和力（平衡或结合）常数K： k= 亲和力常数描述了结合抗原与游离抗原之间
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