Recombinant Human Smad2

货号	BJ-DB3136	规格	50μg、200ug、1mg
表达区间	2-467	种属	Human
宿主	E.Coli	分子量	51.2 kDa
应用范围	Western Blot, ELISA	标签	N-terminal His Tag

纯度：Greater than 95% as determined by SDS-PAGE
应用：Western Blot, ELISA
性状：Lyophilized from a 0.2 μm filtered solution in 10 mM Hepes, 500 mM NaCl with 5% trehalose, pH7.4
溶解方法：Centrifuge the vial at 10,000 rpm for 1 minute, reconstitute at 200 μg/ml in sterile distilled water by gentle pipetting 2-3 times, don’t vortex
存储：-20°C for 12 months as lyophilized; 2-8°C for 1 month under sterile conditions after reconstitution
别名：Drosophila, homolog of, MADR2, hMAD-2, HsMAD2, JV18, JV18-1, JV181, MAD, MAD homolog 2, MAD Related Protein 2, Mad-related protein 2, MADH2, MADR2, MGC22139, MGC34440, Mother against DPP homolog 2, Mothers against decapentaplegic homolog 2, Mothers against decapentaplegic, Drosophila, homolog of, 2, Mothers against DPP homolog 2, OTTHUMP00000163489, Sma and Mad related protein 2

操作步骤：

（一）获得目的基因
1、通过PCR方法：以含目的基因的克隆质粒为模板，按基因序列设计一对引物（在上游和下游引物分别引入不同的酶切位点），PCR循环获得所需基因片段。
2、通过RT-PCR方法：用TRIzol法从细胞或组织中提取总RNA，以mRNA为模板，逆转录形成cDNA第一链，以逆转录产物为模板进行PCR循环获得产物。
3、人工合成法：依照检索到的目的基因序列，设计合成相互重叠的单链寡核苷酸，再通过重叠延伸PCR法拼接出全长，这种方法无需模板，是目前常用的获取基因的手段之一。
（二）构建重组表达载体
1、载体酶切：将表达质粒用限制性内切酶（同引物的酶切位点）进行双酶切，酶切产物行琼脂糖电泳后，用胶回收Kit或冻融法回收载体大片段。
2、PCR产物双酶切后回收，在T4DNA连接酶作用下连接入载体。
（三）获得含重组表达质粒的表达菌种
1、将连接产物转化大肠杆菌，根据重组载体的标志（抗Amp或蓝白斑）作筛选，挑取单斑，碱裂解法小量抽提质粒，双酶切初步鉴定。
2、测序验证目的基因的插入方向及阅读框架均正确，进入下步操作。否则应筛选更多克隆，重复亚克隆或亚克隆至不同酶切位点。
3、以此重组质粒DNA转化表达宿主菌的感受态细胞。
（四）诱导表达
1、挑取含重组质粒的菌体单斑至2ml LB（含Amp50μg/ml）中37℃过夜培养。
2、按1∶50比例稀释过夜菌，一般将1ml菌加入到含50mlLB培养基的300ml培养瓶中，37℃震荡培养至OD600 ≌0.4-1.0（最好0.6，大约需3hr）。
3、取部分液体作为未诱导的对照组，余下的加入IPTG诱导剂至终浓度0.4mM作为实验组，两组继续37℃震荡培养3hr。
4、分别取菌体1ml，离心12000g×30s收获沉淀，用100μl 1%SDS重悬，混匀，70℃10min。
5、离心12000g×1min，取上清作为样品，可做SDS-PAGE等分析。

基本原则:

1. 低温
保存蛋白质时，确保在低温条件下至关重要。低温意味着较低的能量水平，有助于减缓蛋白质分子内部的热运动，减少键的断裂可能性。此外，在低温下，微生物繁殖减缓，潜在的蛋白酶活性降低，从而有助于维持蛋白质的活性。
2. 无菌
在进行蛋白质实验操作时，务必佩戴手套。尽管实验室戴手套通常是为了保护实验者自身，但在生化实验中，蛋白质是我们需要保护的主体。我们皮肤上存在一些蛋白酶，可能会降解蛋白样品。此外，皮肤上的其他化学物质也可能污染蛋白样品。为了防止细菌生长，最好将蛋白质保存在经过灭菌处理的容器中。
3. 浓度
为了提高蛋白质的稳定性，建议以较高浓度保存重组蛋白质，最好保持在1mg/ml以上。高浓度有助于防止蛋白质分子附着在塑料或玻璃管壁上。不容忽视的是，疏水性蛋白质容易附着在管壁上。
4. 分装
蛋白质需要冷冻保存，但在实验中常在室温或更高温度使用。反复冻融过程中产生的冰晶会损害蛋白质的结构和构象。为减少冻融次数，建议将纯化后的蛋白质进行分装保存，每次使用前融化所需量，以确保蛋白质样品经历单次冻融。
5. 速冻／速融
在蛋白质溶冷冻时，为了减少蛋白质分子在高盐度或pH条件下的曝露时间，可选择速冻方法。速冻可通过液氮实现。速冻后，蛋白质可以存放在-20°C或-80°C中，同样，蛋白质的快速融化也是至关重要的，可在温水中进行。
6. 避免震荡
震荡产生的剪切力可能对蛋白质造成破坏。在震荡时，液体中会生成气泡，导致氧气进入，使蛋白质处于氧化环境中。由于蛋白质中的半胱氨酸容易被氧化为胱氨酸，这一过程可能破坏蛋白质的活性。
7. 添加剂
为了确保蛋白质的稳定性，需要将其保存在适当的缓冲液中，并添加一些保护剂。例如，在-20°C保存时，可添加10%-50%的甘油防止结冰，避免冻融过程。此外，还可添加防腐剂抑制细菌生长，或蛋白酶抑制剂（PMSF）以防止蛋白酶对蛋白质的破坏。同时，添加一些还原剂如DTT可防止蛋白质氧化。在选择添加剂时，务必确保其不会影响蛋白的活性。


下列是公司正在出售的产品：

髓样细胞核分化抗原抗体  MNDA  Levetiracetam-d6
减数分裂核分裂蛋白1/GAJ抗体  MND1  Penicillin V Potassium (Phenoxypenicillin potassium salt)
细胞周期G1的相互作用蛋白抗体  MNAT1  NG,NG-di-L-Arginine-d6 (hydrochloride)
多发性骨髓瘤相关蛋白2抗体  MMTAG2  Foscarnet Sodium
6号染色体开放阅读框抗体  MMS22L/C6orf167  Ambroxol-d5
CCL13  单核细胞趋化蛋白4抗体  PPY A
CCL12  单核细胞趋化蛋白5抗体  R916562
MCPIP1  单核细胞趋化诱导蛋白1抗体  RG 13022
TTK  单极纺锤体蛋白激酶1抗体  Rp-8-bromo-Cyclic GMPS (sodium salt)
MOXD1  单加氧酶X抗体  RTC-5
Elbasvir (MK-8742)  肌动蛋白相关蛋白2/3亚型2抗体  ARPC2
ELQ-300  肌动蛋白相关蛋白2/3亚型1A抗体  ARPC1A
Emodepside (Bay 44-4400)  肌动蛋白相关蛋白2/3抗体  ARP2
DprE1-IN-1  肌动蛋白相关蛋白2/3复合亚单位B1抗体  ARPC1B
DRB  肌动蛋白相关蛋白2/3复合物亚基3抗体  p21-ARC
Recombinant Human Smad2半乳糖凝集素3抗体  Galectin 3  Sp-8-bromo-Cyclic AMPS (sodium salt)
G氨基丁酸受体γ3/GABAA Rγ3抗体  GABRG3  MPI-0441138
葡萄糖-6-磷酸酶3/G6Pase-β抗体  G6PC3  ZM 226600
FUT5抗体  FUT5  Tubulysin B
FSCB蛋白抗体  FSCB  TNF-α-IN-1