牛神经生长因子(NGF)ELISA试剂盒

牛神经生长因子(NGF)ELISA试剂盒  

检测原理：

ELISA试剂盒采用抗体夹心法:将抗某蛋白抗体包被于酶标板上，标本和标准品中的某蛋白与抗体结合，加入生物素化的抗某蛋白抗体，再加入SABC复合物与生物素抗体结合，形成免疫复合物，然后加入TMB显色底物，显色剂显蓝色，最候加终止液变黄色，游离的成分被洗去。在450 nm处测OD值，某蛋白浓度与OD值之间呈正比，可通过绘制标准曲线计算出标本中某蛋白的浓度。

本试剂盒采用双抗体夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA）。往预先包被捕获抗体的包被微孔中，依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体，经过温育并彻底洗涤。

用底物TMB显色，TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），计算样品浓度。

此套件的交货时间为2-3天。

*保存温度：2 - 8 C。

*保质期：6个月。

*国内快递.

凡在本公司购买ELISA试剂盒，可提供免费待测服务，视样本数量而定出结果时间，一般一周内出检测结果！本试剂盒用于血清、血浆、组织匀浆、细胞培养上清液及其它生物体液。

 

标本收集与试剂准备: 

1. 血清、血浆样本收集应使用一次性的无热原，无内毒素试管（EDTA、柠檬酸盐、肝素抗凝均可），血清、血浆避免使用溶血，高血脂标本，标本悬浮物应离心去除，使标本清澈透明。待测样本应尽早检测，2-8℃保存48小时；更长时间须冷冻（-20℃或-80℃）保存，避免反复冻融。

2. 洗涤液配置：用蒸馏水1:20稀释（示例：1ml浓缩洗涤液加入19ml的蒸馏水）

3. 标准品配制：取7个1.5ml离心管，分别标注1/2,1/4,1/8,1/16,1/32,1/64，blank。从第壹至七管中分别加入标准品/样品稀释液200ul。在第壹管中加入标准品溶液200ul，置于漩涡混合器上混匀后用加样器吸出200ul，移至第二管。如此反复作对倍稀释，从第六管中吸出200ul弃去，第七管为空白对照。

 

5. 生物素化抗体工作液配置:使用前20分钟，用生物素化抗体稀释液将100×生物素化抗体稀释成1×工作液，根据所需用量配置，当日使用，剩余弃之。

6. TMB显色液的配置：使用前10分钟，将TMB显色液A液和B液1：1混合，避光放置备用。

7. 如果您检测的样本中靶蛋白浓度高于标准品最糕值，建议重新检测，请根据实际情况，适当倍数稀释(建议做预实验，以确定稀释倍数)。

不同研究领域对应的指标：

研究方向 检测指标

细胞治疗 IFN-γ、TNF-a、IL-2、IL-6、IL-10、IL-15、IL-21、Granzyme B 、GM-CSF、BCMA、IDO、HGF……

感染/肝病   IFN-γ、TNF-α、IL-1β、IL-2、IL-6、GM-CSF、CRP、IFN-β、IL-10、IL-18、MCP-1、FGF-19……

风湿免疫/自免  IL-4、IL-5、IL-6、IL-12p70、IL-13、IL-17、IL-18、IL-21、IL-23、CXCL1、MMP-9、TNF-α、GM-CSF、G-CSF……

肿瘤  PD-1、PD-L1、VEGF、VEGFR2、BCMA、TGF-b、FGF-19、PDGF-BB、HGF、CD25、CD28……

心血管   ST2、PCSK9、ACE2、HGF、VEGF、TGF-β1、PDGF-BB、ANGPTL3、GH、CRP……

内分泌/糖尿病  Insulin、Glucagon、Leptin、C-peptide、HGF、ACE2、VEGF、CRP……

神经科   BDNF、b-NGF、Neuropilin-1、ACE2、TGF-β1、VEGF、IL-8、MMP-9、Leptin……

操作步骤

1.从室温平衡 20min 后的铝箔袋中取出所需板条，剩余板条用自封袋密封放回 4℃。

2. 设置标准品孔、样本孔和空白孔，空白孔什么都不加；标准品孔各加不同浓度的标准品 50μL；

3. 待测样本孔先加待测样本 10μL，再加样本稀释液 40μL；

4. 随后标准品孔和样本孔中（空白孔不加）加入辣根过氧化物酶（HRP）标记的检测抗体 50μL，用封板膜封住反应孔，37℃水浴锅或恒温箱温育 60min。

5. 弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液，静置 1min，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复洗 板 5 次（也可用洗板机洗板）。

6. 所有孔加入底物 A、B 各 50μL，37℃避光孵育 15min。

7. 所有孔加入终止液 50μL，15min 内，在 450nm 波长处测定各孔的 OD 值。

结果判断

 绘制标准曲线：在Excel工作表中，以标准品浓度作横坐标，对应OD值作纵坐标，绘制出标准品线性回归曲线，按曲线方程计算各样本浓度值。

免责声明

试剂盒仅供研究使用，不得用于临床实验或生物体实验，否则所产生的一切后果，由实验者承担， 本公司概不负责。

严格按照说明书操作，不同批号不可交换使用，实验者违反说明书操作，后果由实验者承担。

科研ELISA是上海笃玛生物的主营产品，科研ELISA栏目提供该类目产品说明书以及提供产品报价与网上订购。

 

上海笃玛生物科技有限公司经过数年的努力发展已迅速成为集产品研发、生产、经营为一体的专业化生物工程公司。公司具有完善的实验技术开发平台，成熟的抗原、抗体研发系统，熟练掌握各种酶联技术，结合公司的研发团队，可以有效的保证公司产品强的稳定性和高的准确性，同时又具有竞争力的价格。

 

公司目前主要提供生化试剂、分子生物学试剂及试剂盒，各种抗体及免疫学试剂盒、实验耗材等多门类上万种产品，产品涉及分子生物学、细胞生物学、免疫学等生命科学的各个领域。

 

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