- ￥339
- 碧云天（beyotime）
- D0346
- 国产
- 2025年07月13日
企业认证
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
现货
- 保质期：
两年
- 供应商：
上海经科化学科技有限公司
- 保存条件：
-80 ℃
- 规格：
200μl
产品简介：
碧云天生产的DH10Bac甘油菌，是收集生长在对数期的DH10Bac菌，加入含有甘油的细菌冻存液制备而成。可以直接划平板或小量、大量培养。
DH10Bac是昆虫杆状病毒Bac-to-Bac系统中常用的同源重组大肠杆菌菌株。该菌株含有杆状病毒穿梭载体(baculovirus shuttle vector) bMON14272(俗称bacmid，其含有一个转座反应必须的mini-attTn7重组位点)和一个辅助质粒pMON7124(用于表达转座所需的转座蛋白)。DH10Bac主要用作pFastBac等类似载体转化的宿主菌株。当pFastBac重组质粒转化进入DH10Bac细胞后，pFastBac载体上的mini-Tn7位点和DH10Bac宿主菌中bacmid上的mini-attTn7位点之间发生转座(transposition)，产生重组的bacmid。重组的bacmid在转染昆虫细胞后可产生含有重组子的杆状病毒，后者进一步感染昆虫细胞后即可启动外源重组蛋白的表达。
DH10Bac宿主包含的bacmid bMON14272含小型F复制子，卡那霉素抗性基因，mini-attTn7位点和lacZα互补因子(可通过蓝白斑筛选)；辅助质粒pMON7124包含四环素抗性和tnsABCD区域，该区域表达转座反应所需的转座蛋白。携带T7转座原件(Tn7 element)的供体质粒pFastBac (donor pFastBac plasmid)带有庆大霉素抗性基因，杆状病毒多角体启动子，多克隆位点区域和SV40的多腺苷酸化信号。
使用碧云天超级感受态细菌制备试剂盒(D0302)制备DH10Bac感受态细胞，转化在多克隆位点插入目的基因的pFastBac重组质粒产生重组的bacmid，利用碧云天生产的杆状病毒穿梭载体bacmid小量抽提试剂盒(D0031)提取重组bacmid DNA，将重组bacmid DNA转染进入昆虫细胞(推荐使用碧云天生产的LipoInsect™昆虫细胞转染试剂C0551)产生重组杆状病毒，扩增重组的杆状病毒并用其感染昆虫细胞，就可以大规模表达重组目的蛋白。
DH10Bac菌株具有卡那霉素抗性和四环素抗性，pFastBac质粒具有庆大霉素(Gentimicin)抗性和氨苄青霉素抗性。
DH10Bac菌株基因型：F- mcrA Δ(mrr-hsdRMS-mcrBC) Φ80lacZΔM15 ΔlacX74 recA1 endA1 araD139 Δ(ara,leu)7697 galU galK λ-rpsL nupG / pMON14272 / pMON7124。
重组后的克隆用蓝白斑进行筛选，重组成功的克隆在含有卡那霉素和四环素抗性的IPTG/X-Gal LB平板上呈现为白色菌落。
本菌株可以使用常规的LB培养基或SOC培养基进行培养。
保存条件：
-20℃保存，至少3个月有效。-80℃可以长期保存。
注意事项：
使用本甘油菌时可以不必完全融解，在甘油菌表面蘸取少量涂板或进行液体培养即可。也可以完全融解后使用，但随着冻融次数的增加细菌的活力会逐渐下降。在没有结冻的情况下，菌体会逐渐沉淀至管底，请务必注意适当混匀后使用。
为保证菌种纯正，避免其它细菌污染，尽量先划平板然后再挑单克隆菌落进行后续操作。
本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
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文献和实验（如果用玻璃棒涂抹，酒精灯烧过后稍微凉一下再用，不要过烫）。(2) 菌液完全被培养基吸收后，倒置培养皿，于37℃恒温培养箱内培养过夜(12-16小时)，待菌落生长良好而又未互相重叠时停止培养，对于可以蓝白斑筛选的质粒和菌株来说，此时应该能清楚地看到蓝色和白色菌落。用 CaCl2法制备的感受态细胞，可使每微克超螺旋质粒 DNA产生5×106-2×107个转化菌落。在实际工作中，每微克有105以上的转化菌落足以满足一般的克隆实验。4) 检出转化体和计算转化率各实验组在培养皿内菌落生长状况及结果分析转化
成分。5.优化表达条件（1）重组蛋白不表达或者表达量低。如果重组蛋白不表达（包含体和可溶蛋白都没有）通过改变诱导剂浓度，诱导温度，时间等都不表达的时候，然后尝试更换菌株、质粒载体。降低诱导后培养温度。重组蛋白表达得越慢，其折叠效果就越好，大肠杆菌在4℃时依然可以表达重组蛋白，而将培养温度降低至25-30℃就能显著改善蛋白折叠。此方法不适用于温度诱导的重组蛋白表达；减少诱导剂。诱导剂浓度可以降低至1/10；选用Lac渗透酶缺陷型菌株，如Tuner、Rosetta等，也有很好的效果。这类菌株能够使进入每个细胞
5 a 感受态细胞，以便于保存。 4 、重组腺病毒的制备： 将 PacI 酶切线性化的高纯度高浓度重组腺病毒质粒，以脂质体介导的方式转染 293 细胞， 7 ～ 10 天出现噬斑，待完全病变后，收集细胞和上清，于 -70 ℃ 保存。 5 、重组腺病毒的鉴定 在基因水平，提取腺病毒基因组 DNA ，采用目的基因的引物， PCR 扩增病毒基因组 DNA ；并采用相应的引物，检测是否含有复制型腺病毒。 在蛋白水平，分泌蛋白，采用 ELISA 检测目的基因的表达；膜蛋白
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