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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存:
24
- 英文名:
4-Methylumbelliferyl 6-thio-Palmitate-β-D-Glucopyranoside
- CAS号:
229644-17-1
- 供应商:
上海莼试
- 保存条件:
Store at -20°C
- 规格:
500μg 1mg 5mg
| 产品名称 | 4-Methylumbelliferyl 6-thio-Palmitate-β-D-Glucopyranoside | 产品货号 | CS-01Y75642 |
| 规格 | 500μg 1mg 5mg | CAS号 | 229644-17-1 |
| 含量 | >95.00% | 分子式 | C32H48O8S |
| 分子量 | 592.8 | 用途 | 仅供科研研究使用 |
4-Methylumbelliferyl 6-thio-palmitate-β-D-glucopyranoside is a fluorogenic substrate of palmitoyl-protein thioesterase (PPT, also known as CLN1), a lysosomal hydrolase that removes long-chain fatty acyl groups from modified cysteine residues in proteins. 4-Methylumbelliferyl 6-thio-palmitate-β-D-glucopyranoside is cleaved by PPT/CLN1 to release the fluorescent moiety 4-methylumbelliferyl (4-MU). 4-MU fluorescence is pH-dependent with excitation maxima of 320 and 360 nm at low (1.97-6.72) and high (7.12-10.3) pH, respectively, and an emission maximum ranging from 445 to 455 nM, increasing as pH decreases. This substrate is used in assays that measure PPT activity, which is commonly deficient in the neurodegenerative disorder known as infantile neuronal ceroid lipofuscinosis.
化学性质:
规格:500μg 1mg 5mg
CAS:229644-17-1
别名:N/A
化学名:N/A
分子式:C32H48O8S
分子量:592.8
溶解度:DMF: 30 mg/mL,DMSO: 30 mg/mL
储存条件:Store at -20°C
General tips:For obtaining a higher solubility , please warm the tube at 37 ℃ and shake it in the ultrasonic bath for a while.
Shipping Condition: Evaluation sample solution : ship with blue ice All other available size: ship with RT , or blue ice upon request
使用方法:
1. 常用筛选浓度
注意:用来筛选稳转株的工作浓度需要根据细胞类型,培养基,生长条件和细胞代谢率而变化,推荐使用浓度为50-1000μg/mL。对于第一次使用的实验体系建议通过建立杀灭曲线(kill curve),即剂量反应性曲线,来确定最佳筛选浓度。
一般而言,哺乳动物细胞50-500μg/mL;细菌/植物细胞20-200μg/mL;真菌300-1000μg/mL。
2. 杀灭曲线的建立
注意:为了筛选得到稳定表达目的蛋白的细胞株,需要确定能够杀死未转染宿主细胞的抗生素浓度,可通过建立杀灭曲线(剂量反应曲线)来实现,至少选择5个浓度。
1) 第一天:未转化的细胞按照20-25%的细胞密度铺在合适的培养板上,37℃,CO2培养过夜;注:对于需要更高密度来检测活力的细胞,可增加接种量。
2) 根据细胞类型,设定合适范围内的浓度梯度。以哺乳动物细胞为例,可设定50,100,250,500,750,1000μg/mL。先用去离子水或者PBS buffer按照1:10的比例将母液稀释到5 mg/ml,然后按照下表稀释到相应浓度的工作液。
3) 第二天:替换旧的培养基,换用新鲜配制的含有相应浓度药物的培养基。每个浓度做三个平行孔。
4) 接下来每3-4天更换新的含药物培养基。
5) 按照固定的周期(如每2天)进行活细胞计数来确定阻止未转染细胞生长的恰当浓度。选择在理想的天数(通常是7-10天)内能够杀死绝大多数细胞的浓度为稳定转染细胞筛选用的工作浓度。
3. 稳定转染细胞的筛选
1) 转染48h后,用含有适当浓度的潮霉素B筛选培养基来传代细胞(直接传代或者稀释后传代)。
注意:细胞处于活跃分裂状态时抗生素的杀伤。则当细胞过于稠密,其效率会降低。为了得到较好的筛选效果,最好将细胞稀释至丰度不超过25%
2) 每隔3-4天更换含有药物的筛选培养液。
3) 筛选7天后观察并评估细胞克隆(集落)的形成情况。集落的形成可能还需要一周或者更多的时间,这取决于宿主细胞类型,转染,以及筛选效果。
4) 挑取并转移5-10个抗性克隆于35mm细胞培养板,继续用含药物的筛选培养液维持培养7天。
5) 之后更换正常培养基培养即可。
蛋白酶抑制剂混合物实验步骤:
(1)4-Methylumbelliferyl 6-thio-Palmitate-β-D-Glucopyranoside实验开始前将RNA提取液于65℃水浴锅中预热,离心管中加入ME(巯基乙醇),(10mL加80ul,50mL中加入300ul)
(2)取约0.8g菌丝体(液体培养获得的菌丝用真空抽滤即可!固体培养就更好说了),在液氮中迅速磨成精细粉末,装入50mL离心管,按1g材料8mL的量加入预热的RNA提取液,颠倒混匀
(3)65℃水浴3-10 min,期间混匀2-3次
(4)加入等体积的酚(注意是酸酚pH4.5)::yi戊醇(25:24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(5)取上清,等体积的yi戊醇(24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(6)加入1/4V体积10M LiCl溶液,4℃放置6h以上(或过夜)
(7)10,000rpm,4℃离心20min
(8)弃上清,用500ul SSTE溶解沉淀
(9)酚::yi戊醇(25:24:1)抽提两次,:yi戊醇(24:1)抽提1次(10,000rpm,4℃,5min)
(10)加2V体积的无水乙醇,在-70℃冰箱沉淀30min以上
(11)12,000rpm,4℃离心20 min
(12)弃上清.沉淀用70%酒精漂洗一次,干燥
(13)加200ul的DEPC处理水溶解
(14)用非变性琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计扫描检测RNA的质量(在抽提过程中,若蛋白质含量或其它的杂质还较多,可以增加抽提次数)
公司正在出售的产品:
| Boc-Homocys(Mbzl)-OH | SB 215505 |
| SB 216763 | Salusin Beta检测试剂盒 Salusin β ELISA Kit |
| SB 218078 | Salusin Alpha检测试剂盒 Salusin α ELISA Kit |
| SB 224289 hydrochloride | S100钙结合蛋白P检测试剂盒 S100P ELISA Kit |
| SB 239063 | SAALDL复合物检测试剂盒 SAALDL ELISA Kit |
| SB 242084 | S100钙结合蛋白A9/钙粒蛋白B检测试剂盒 S100A9 ELISA Kit |
| SB 242235 | S100钙结合蛋白A8/钙粒蛋白A检测试剂盒 S100A8 ELISA Kit |
| SB 243213 | ACTN-3 ELISA Kit |
| SB 258719 | SH2携带蛋白检测试剂盒 SHC/SLP-76 ELISA Kit |
| SB 271046 Hydrochloride | SPARC相关模块化钙结合蛋白1检测试剂盒 SMOC1 ELISA Kit |
| SB 277011A dihydrochloride | SPARC相关模块化钙结合蛋白2检测试剂盒 SMOC2 ELISA Kit |
| SB 366791 | STAT3蛋白抑制分子检测试剂盒 PIAS3 ELISA Kit |
| SB 399885 hydrochloride | 4-Methylumbelliferyl 6-thio-Palmitate-β-D-GlucopyranosideStathmin 1检测试剂盒 STMN1 ELISA Kit |
| Trigonelline | STEAP家族成员1检测试剂盒 Steap1 ELISA Kit |
| s腺苷同型半胱氨酸检测试剂盒 SAH ELISA Kit | STEAP家族成员4检测试剂盒 Steap4 ELISA Kit |
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文献和实验异丙基-1-硫代β-D吡喃(型)半乳糖 isop-ropyl-1-thio-β-D-galactopyranoside
异丙基 -1-硫代β -D吡喃(型)半乳糖 isop-ropyl-1-thio-β -D-galactopyranoside 为 isopropyl-1-thio-β -D-galactopyranoside的缩写。是诱导大肠杆菌乳糖操纵子酶合成的强力诱导物。在培养基中加入该物 10-4 克分子时,即可通过存在于大肠杆菌细胞膜中的微量半乳糖苷渗透酶而被参入至细菌体内。通常诱导物质即根据这种通过操纵子的作用制造的β -半乳糖糖苷酶而被利用于代谢的。但 IPTG等不能
Rapid Identification of Cloned HIV-1 Fragments
-fragment of β-galactosidase were developed (pUC vectors) (3 ,4 ). Upon induction by IPTG (isopropyl-β-D -thio-galactopyranoside), the expressed β-galactosidase could cleave X-gal (5-bromo-4-choloro-3-indoyl-β-D -galactopyranoside) and turn the colonies
非代谢性诱导物质 non-metabolizable inducer
这类物质尽管不能被代谢利用,却能诱导酶的合成。因为它可使细胞进行无偿地诱导酶的合成,故有时亦称无偿性诱导物质。例如诱导β-半乳糖苷酶的IPTG和MTG(methyl-1-thio-β-D-galactopy- ranoside,甲基-硫代-β-半乳糖吡喃糖苷)等都是属于这类物质。
技术资料暂无技术资料 索取技术资料









