- ￥600 - 3200
- 上海莼试
- CS-01Y75699
- 国产
- 2025年07月06日
企业认证
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
24
- 英文名：
AF-DX 116
- CAS号：
102394-31-0
- 供应商：
上海莼试
- 保存条件：
Store at RT
- 规格：
10mg 50mg
规格：10mg 50mg
CAS：102394-31-0
别名：
化学名：(S)-11-(2-(2-((diethylamino)methyl)piperidin-1-yl)acetyl)-5H-benzo[e]pyrido[3,2-b][1,4]diazepin-6(11H)-one
AF-DX 116分子式：C24H31N5O2
分子量：421.54
溶解度：<10.54mg/ml in DMSO
储存条件：Store at RT
General tips：For obtaining a higher solubility , please warm the tube at 37 ℃ and shake it in the ultrasonic bath for a while.
Shipping Condition: Evaluation sample solution : ship with blue ice All other available size: ship with RT , or blue ice upon request
本产品仅供科学实验研究使用! 不能用于临床或动物诊断！
| 产品名称 | AF-DX 116 | 产品货号 | CS-01Y75699 |
| 规格 | 10mg 50mg | CAS号 | 102394-31-0 |
| 含量 | >98.00% | 分子式 | C24H31N5O2 |
| 分子量 | 421.54 | 用途 | 仅供科研研究使用 |
1. 常用筛选浓度
注意：用来筛选稳转株的工作浓度需要根据细胞类型，培养基，生长条件和细胞代谢率而变化，推荐使用浓度为50-1000μg/mL。对于第一次使用的实验体系建议通过建立杀灭曲线(kill curve)，即剂量反应性曲线，来确定最佳筛选浓度。
一般而言，哺乳动物细胞50-500μg/mL;细菌/植物细胞20-200μg/mL;真菌300-1000μg/mL。
2. 杀灭曲线的建立
注意：为了筛选得到稳定表达目的蛋白的细胞株，需要确定能够杀死未转染宿主细胞的抗生素浓度，可通过建立杀灭曲线(剂量反应曲线)来实现，至少选择5个浓度。
1) 第一天：未转化的细胞按照20-25%的细胞密度铺在合适的培养板上，37℃，CO2培养过夜;注：对于需要更高密度来检测活力的细胞，可增加接种量。
2) 根据细胞类型，设定合适范围内的浓度梯度。以哺乳动物细胞为例，可设定50，100，250，500，750，1000μg/mL。先用去离子水或者PBS buffer按照1:10的比例将母液稀释到5 mg/ml，然后按照下表稀释到相应浓度的工作液。
3) 第二天：替换旧的培养基，换用新鲜配制的含有相应浓度药物的培养基。每个浓度做三个平行孔。
4) 接下来每3-4天更换新的含药物培养基。
5) 按照固定的周期(如每2天)进行活细胞计数来确定阻止未转染细胞生长的恰当浓度。选择在理想的天数(通常是7-10天)内能够杀死绝大多数细胞的浓度为稳定转染细胞筛选用的工作浓度。
3. 稳定转染细胞的筛选
1) 转染48h后，用含有适当浓度的潮霉素B筛选培养基来传代细胞(直接传代或者稀释后传代)。
注意：细胞处于活跃分裂状态时抗生素的杀伤。则当细胞过于稠密，其效率会降低。为了得到较好的筛选效果，最好将细胞稀释至丰度不超过25%
2) 每隔3-4天更换含有药物的筛选培养液。
3) 筛选7天后观察并评估细胞克隆(集落)的形成情况。集落的形成可能还需要一周或者更多的时间，这取决于宿主细胞类型，转染，以及筛选效果。
4) 挑取并转移5-10个抗性克隆于35mm细胞培养板，继续用含药物的筛选培养液维持培养7天。
5) 之后更换正常培养基培养即可。
蛋白酶抑制剂混合物实验步骤:
(1)实验开始前将RNA提取液于65℃水浴锅中预热,离心管中加入ME(巯基乙醇),(10mL加80ul,50mL中加入300ul)
(2)取约0.8g菌丝体(液体培养获得的菌丝用真空抽滤即可！固体培养就更好说了),在液氮中迅速磨成精细粉末,装入50mL离心管,按1g材料8mL的量加入预热的RNA提取液,颠倒混匀
(3)65℃水浴3-10 min,期间混匀2-3次
(4)加入等体积的酚(注意是酸酚pH4.5)::yi戊醇(25:24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(5)取上清,等体积的yi戊醇(24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(6)加入1/4V体积10M LiCl溶液,4℃放置6h以上(或过夜)
(7)10,000rpm,4℃离心20min
(8)弃上清,用500ul SSTE溶解沉淀
(9)酚::yi戊醇(25:24:1)抽提两次,:yi戊醇(24:1)抽提1次(10,000rpm,4℃,5min)
(10)加2V体积的无水乙醇,在-70℃冰箱沉淀30min以上
(11)12,000rpm,4℃离心20 min
(12)弃上清.沉淀用70%酒精漂洗一次,干燥
(13)加200ul的DEPC处理水溶解
(14)用非变性琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计扫描检测RNA的质量(在抽提过程中,若蛋白质含量或其它的杂质还较多,可以增加抽提次数)
公司正在出售的产品:
| Boc-Dab-OtBu . HCl | PFM39 |
| PG 01 | 鱼褪黑素检测试剂盒 |
| PG 01037 dihydrochloride | 鱼细胞色素C氧化酶检测试剂盒 |
| PGLa | 鱼白三烯B4检测试剂盒 |
| PGLa TFA | 鱼γ干扰素检测试剂盒 |
| P-gp modulator 1 | 鱼热休克蛋白40检测试剂盒 |
| PGP-4008 | 鱼前列腺素E2检测试剂盒 |
| PGPC | t-PA ELISA Kit |
| PH-797804 | 鱼乙酰胆碱酯酶检测试剂盒 |
| PHA 543613 hydrochloride | 鱼磷酸化腺苷酸活化蛋白激酶检测试剂盒 |
| PHA 568487 | 鱼胰岛素受检测试剂盒 |
| PHA-665752 | 鱼上腺素检测试剂盒 |
| PHA-680632 | AF-DX 116鱼环磷酸腺苷检测试剂盒 |
| URB597 | 鱼谷胱甘肽过氧化物酶检测试剂盒 |
| 鱼肿瘤坏死因子α检测试剂盒 | 鱼过氧化氢酶检测试剂盒 |
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文献和实验淡墨留痕 我们最近在培养ＨＣＴ１１６细胞，发现其状态不是很好，很容易扎堆生长，用胰酶消化的时候也是一团一团地被消化下来，很难把它们吹散成一个一个细胞。而且长得也挺快也挺不均匀的，传代的第二天，有些地方就长得满满的了。想请教一下这是为什么呢 五月鱼 你好， 我养的细胞和你一样，消化下来也是一团的，但吹打以后就没有这样的情况了。建议你分皿前还是要吹匀，分皿后在镜下看一看，移动培养皿的时候尽量动作轻，避免晃动。
妍会 最近在养HCT116细胞，DMEM+10%胎牛血清，感觉细胞生长状态不好，虽然2天换液，但是培养基里悬浮有很多死细胞，细胞生长缓慢。最主要的，贴壁的细胞中有很大团的东西，又不像是细胞，消化之后，那些大团的东西就成了大泡，比正常细胞大数倍。养了大约2周后发现正常细胞变少了，大泡反而增多了，好像细胞被吃掉了一样。非常想知道是什么原因，不知道这种细胞状态做了转染之后会是怎么样的？急求高手指教！先谢了！ zhangshuxian
产品规格 型号 DX 衰减电位范围 ±1000V→±100V/±1000V→±10V 计时器显示 000.0sec~999.9sec
技术资料暂无技术资料 索取技术资料
