Recombinant Human Granzyme K

货号	BJ-DB2578	规格	50μg、200ug、1mg
表达区间	27-264	种属	Human
宿主	E.Coli	分子量	26.1 kDa
应用范围	Western Blot, ELISA	标签	N-terminal His Tag

纯度：Greater than 95% as determined by SDS-PAGE
应用：Western Blot, ELISA
性状：Lyophilized from a 0.2 μm filtered solution in 10 mM Hepes, 500 mM NaCl with 5% trehalose, pH7.4
溶解方法：Centrifuge the vial at 10,000 rpm for 1 minute, reconstitute at 200 μg/ml in sterile distilled water by gentle pipetting 2-3 times, don’t vortex
存储：-20°C for 12 months as lyophilized; 2-8°C for 1 month under sterile conditions after reconstitution
别名：Fragmentin 3, Fragmentin-3, Fragmentin3, GRAK_HUMAN, Granzyme 3, Granzyme K, granzyme K (granzyme 3; tryptase II), granzyme K (serine protease, granzyme 3; tryptase II), Granzyme K precursor, Granzyme-3, Granzyme3, GranzymeK, GZMK, NK TRYP 2, NK TRYP2, NK tryptase 2, NK-TRYP-2, NK-tryptase-2, NKTRYP2, Serine protease granzyme 3, TRYP 2, TRYP2, Tryptase II, TryptaseII

基本原则:

1. 低温
保存蛋白质时，确保在低温条件下至关重要。低温意味着较低的能量水平，有助于减缓蛋白质分子内部的热运动，减少键的断裂可能性。此外，在低温下，微生物繁殖减缓，潜在的蛋白酶活性降低，从而有助于维持蛋白质的活性。
2. 无菌
在进行蛋白质实验操作时，务必佩戴手套。尽管实验室戴手套通常是为了保护实验者自身，但在生化实验中，蛋白质是我们需要保护的主体。我们皮肤上存在一些蛋白酶，可能会降解蛋白样品。此外，皮肤上的其他化学物质也可能污染蛋白样品。为了防止细菌生长，最好将蛋白质保存在经过灭菌处理的容器中。
3. 浓度
为了提高蛋白质的稳定性，建议以较高浓度保存重组蛋白质，最好保持在1mg/ml以上。高浓度有助于防止蛋白质分子附着在塑料或玻璃管壁上。不容忽视的是，疏水性蛋白质容易附着在管壁上。
4. 分装
蛋白质需要冷冻保存，但在实验中常在室温或更高温度使用。反复冻融过程中产生的冰晶会损害蛋白质的结构和构象。为减少冻融次数，建议将纯化后的蛋白质进行分装保存，每次使用前融化所需量，以确保蛋白质样品经历单次冻融。
5. 速冻／速融
在蛋白质溶冷冻时，为了减少蛋白质分子在高盐度或pH条件下的曝露时间，可选择速冻方法。速冻可通过液氮实现。速冻后，蛋白质可以存放在-20°C或-80°C中，同样，蛋白质的快速融化也是至关重要的，可在温水中进行。
6. 避免震荡
震荡产生的剪切力可能对蛋白质造成破坏。在震荡时，液体中会生成气泡，导致氧气进入，使蛋白质处于氧化环境中。由于蛋白质中的半胱氨酸容易被氧化为胱氨酸，这一过程可能破坏蛋白质的活性。
7. 添加剂
为了确保蛋白质的稳定性，需要将其保存在适当的缓冲液中，并添加一些保护剂。例如，在-20°C保存时，可添加10%-50%的甘油防止结冰，避免冻融过程。此外，还可添加防腐剂抑制细菌生长，或蛋白酶抑制剂（PMSF）以防止蛋白酶对蛋白质的破坏。同时，添加一些还原剂如DTT可防止蛋白质氧化。在选择添加剂时，务必确保其不会影响蛋白的活性。

操作步骤：

（一）获得目的基因
1、通过PCR方法：以含目的基因的克隆质粒为模板，按基因序列设计一对引物（在上游和下游引物分别引入不同的酶切位点），PCR循环获得所需基因片段。
2、通过RT-PCR方法：用TRIzol法从细胞或组织中提取总RNA，以mRNA为模板，逆转录形成cDNA第一链，以逆转录产物为模板进行PCR循环获得产物。
3、人工合成法：依照检索到的目的基因序列，设计合成相互重叠的单链寡核苷酸，再通过重叠延伸PCR法拼接出全长，这种方法无需模板，是目前常用的获取基因的手段之一。
（二）构建重组表达载体
1、载体酶切：将表达质粒用限制性内切酶（同引物的酶切位点）进行双酶切，酶切产物行琼脂糖电泳后，用胶回收Kit或冻融法回收载体大片段。
2、PCR产物双酶切后回收，在T4DNA连接酶作用下连接入载体。
（三）获得含重组表达质粒的表达菌种
1、将连接产物转化大肠杆菌，根据重组载体的标志（抗Amp或蓝白斑）作筛选，挑取单斑，碱裂解法小量抽提质粒，双酶切初步鉴定。
2、测序验证目的基因的插入方向及阅读框架均正确，进入下步操作。否则应筛选更多克隆，重复亚克隆或亚克隆至不同酶切位点。
3、以此重组质粒DNA转化表达宿主菌的感受态细胞。
（四）诱导表达
1、挑取含重组质粒的菌体单斑至2ml LB（含Amp50μg/ml）中37℃过夜培养。
2、按1∶50比例稀释过夜菌，一般将1ml菌加入到含50mlLB培养基的300ml培养瓶中，37℃震荡培养至OD600 ≌0.4-1.0（最好0.6，大约需3hr）。
3、取部分液体作为未诱导的对照组，余下的加入IPTG诱导剂至终浓度0.4mM作为实验组，两组继续37℃震荡培养3hr。
4、分别取菌体1ml，离心12000g×30s收获沉淀，用100μl 1%SDS重悬，混匀，70℃10min。
5、离心12000g×1min，取上清作为样品，可做SDS-PAGE等分析。

下列是公司正在出售的产品：

RRAGD蛋白抗体  RRAGD  Clofibric Acid-d4
RAS相关GTP结合蛋白C抗体  RRAGC  2-hexacosane
RAS相关GTP结合蛋白A抗体  RRAGA + RRAGB  20-HEPE
RRAD抗体  RRAD  Butenafine-13C-d3 (hydrochloride)
细胞分化蛋白质RCD1抗体  RQCD1  Ziprasidone D8
mouse Qa-2/FITC  FITC标记小鼠Qa-2单克隆抗体  MST-312
human CD11b/FITC  FITC标记小鼠抗人CD11b单克隆抗体  MSC 2032964A
Troponin C (cTnC), FITC conjugated  FITC标记心肌肌钙蛋白单克隆抗体  MRIA9
FITM1  FITM1蛋白抗体  MPTP hydrochloride
FITM2  FITM2蛋白抗体  Myricetin
Conivaptan-d4  神经肽S抗体  Neuropeptide S
Cimetidine sulfoxide  神经肽Q抗体  Neuropeptide Q
Ciproxifan maleate  神经肽NPSF抗体  NPVF/RFRP
Clomipramine HCl  神经肽G蛋白偶联受体抗体  NPFF2
Clomipramine-d3 (hydrochloride)  神经损伤诱导蛋白2/NINJ2抗体  Ninjurin 2
Recombinant Human Granzyme KHTRA4  丝氨酸肽酶4抗体  Lurasidone HCl
SAKS1/2B28  丝裂原活化蛋白激酶底物1抗体  Loxapine Succinate
DAPK1  死亡相关蛋白激酶1单克隆抗体  LP-211
KCNK3  酸敏感性钾离子通道蛋白抗体  NKP608
MyD88  髓样分化蛋白抗体  L-732,138