pCMV-MCS-P2A-EGFP-HA-Bla

产品简介：
pCMV-MCS-P2A-EGFP-HA-Bla是碧云天研发的用于在哺乳动物细胞中同时表达目的蛋白、增强绿色荧光蛋白EGFP和灭瘟素S (Blasticidin S)抗性基因的表达质粒。

本质粒含有的CMV启动子可以高效启动目的基因的表达，同时可以通过P2A共表达增强绿色荧光蛋白EGFP，便于通过EGFP的荧光特性监测目的蛋白的表达情况。本质粒的表达效果可以参考图1。

图1. 碧云天pCMV-MCS-P2A-EGFP-HA-Bla质粒使用Lipo8000™转染试剂(C0533)转染293T细胞后的表达效果图。左侧为明场照片，右侧为荧光照片。本图仅供参考，实际拍摄效果会因具体实验条件的不同而有所不同。

本质粒在多克隆位点和EGFP的编码序列之间含有P2A肽序列。P2A是一个可以被理解为含有19个氨基酸残基(ATNFSLLKQAGDVEENPGP)的“自剪切”小肽。但实际的过程并不是发生自剪切，而是使核糖体跳过P2A等2A元件C端的甘氨酸和脯氨酸肽键的合成而发挥作用，最终导致2A序列末端和下游产物分离。上游目的基因表达蛋白的C端将会添加一些额外的P2A残基(GSGATNFSLLKQAGDVEENPG)，而下游蛋白的N端将会有额外的脯氨酸。在P2A肽的N端加入GSG序列，可提高剪切效率 [1,2]。

本质粒为氨苄青霉素(Ampicillin)和灭瘟素S (Blasticidin S)抗性。可利用其氨苄青霉素抗性，转化大肠杆菌后筛选阳性克隆。转染哺乳动物细胞后，可使用Blasticidin S (ST018)筛选稳定表达目的蛋白的细胞株。

pCMV-MCS-P2A-EGFP-HA-Bla质粒的主要信息如下：

Feature Nucleotide	Position
AmpR	63-923
AmpR promoter	924-1016
CMV enhancer	1101-1404
CMV promoter	1405-1608
T3 promoter	1654-1672
P2A	1769-1834
EGFP	1835-2551
HA	2558-2584
T7 promoter	2639-2657
SV40 poly(A) signal	2931-3052
f1 ori	3059-3514
AmpR promoter	3541-3645
SV40 promoter	3647-4004
SV40 ori	3855-3990
BSD	4039-4437
HSV TK poly(A) signal	4669-4716
ori	5045-5633

pCMV-MCS-P2A-EGFP-HA-Bla质粒(5741bp)的图谱如下：

pCMV-MCS-P2A-EGFP-HA-Bla的多克隆位点的详细图谱见说明书

pCMV-MCS-P2A-EGFP-HA-Bla中没有的酶切位点包括：

AarI	AbsI	AccIII	AccB7I	AcvI	AfeI	AgeI
AhlI	Aor13HI	Aor51HI	AscI	AsiGI	AsiSI	AspI
BaeI	BbeI	BbrPI	BbvCI	BcuI	BoxI	BseAI
BsePI	BshTI	BsiWI	Bsp13I	BspEI	BspQI	BssHII
BssNAI	Bst1107I	BstEII	BstENI	BstPI	BstPAI	BstZ17I
CpoI	CspI	CspAI	DinI	Eco47III	Eco72I	Eco91I
EcoNI	EcoO65I	EgeI	EheI	FseI	FspAI	I-CeuI
I-PpoI	I-SceI	KasI	Kpn2I	LguI	MauBI	Mly113I
MreI	MroI	MssI	NarI	PalAI	PauI	PciSI
Pfl23II	PflFI	PflMI	PI-PspI	PI-SceI	PinAI	PluTI
PmaCI	PmeI	PmlI	PshAI	PspCI	PspEI	PspLI
PspXI	PsrI	PsyI	RgaI	RigI	RsrII	Rsr2I
SanDI	SapI	SbfI	SdaI	SfaAI	SfoI	SgfI
SgrAI	SgrDI	SgsI	SmiI	SpeI	Sse8387I	SspDI
SwaI	Tth111I	Van91I	XagI	XcmI

pCMV-MCS-P2A-EGFP-HA-Bla中的单酶切位点包括：

AccI	GT`MK,AC	1752	HpaI	GTT|AAC	2930
AhdI	GACNN,N`NNGTC	2583	MfeI	C`AATT,G	2917
AflII	C`TTAA,G	136	MluI	A`CGCG,T	3053
ApaI	G,GGCC`C	2592	MscI	TGG|CCA	4042
BamHI	G`GATC,C	1721	NdeI	CA`TA,TG	1274
BbsI	GAAGACNN`NNNN,	4124	NheI	G`CTAG,C	1631
BclI	T`GATC,A	2824	NotI	GC`GGCC,GC	1702
BfuAI	ACCTGCNNNN`NNNN,	4489	NruI	TCG|CGA	4270
BglII	A`GATC,T	1757	PaeR7I	C`TCGA,G	1763
BlpI	GC`TNA,GC	4434	PciI	A`CATG,T	5689
BmgBI	CAC|GTC	1813	PpuMI	RG`GWC,CY	4198
BmtI	G,CTAG`C	1635	PspOMI	G`GGCC,C	2588
BsaXI	,NNN`(N)9ACNNNNNCTCCNNNNNNN,NNN`	3217	PstI	C,TGCA`G	1737
BsmBI	CGTCTCN`NNNN,	1803	SacI	G,AGCT`C	1689
BspDI	AT`CG,AT	4007	SacII	CC,GC`GG	1696
BspMI	ACCTGCNNNN`NNNN,	4489	SalI	G`TCGA,C	1751
BsrGI	T`GTAC,A	2544	ScaI	AGT|ACT	616
BstBI	TT`CG,AA	4453	SfiI	GGCCN,NNN`NGGCC	3942
BstXI	CCAN,NNNN`NTGG	1697	SmaI	CCC|GGG	1716
ClaI	AT`CG,AT	4007	SnaBI	TAC|GTA	1380
DraIII	CAC,NNN`GTG	3283	SrfI	GCCC|GGGC	1716
EarI	CTCTTCN`NNN,	931	StuI	AGG|CCT	3985
Eco53kI	GAG|CTC	1687	TspMI	C`CCGG,G	1714
EcoRI	G`AATT,C	1739	XbaI	T`CTAG,A	2552
EcoRV	GAT|ATC	1747	XhoI	C`TCGA,G	1763
Esp3I	CGTCTCN`NNNN,	1803	XmaI	C`CCGG,G	1714
HindIII	A`AGCT,T	1727	XmnI	GAANN|NNTTC	735

pCMV-MCS-P2A-EGFP-HA-Bla质粒中对插入片段进行测序时，推荐使用的正向测序引物T3和反向测序引物EGFP primer的序列如下：

T3 primer (1654-1672): 5' AATTAACCCTCACTAAAGG 3'

EGFP primer (1837-1853): 5' CCTCGCCCTTGCTCACC 3'

pCMV-MCS-P2A-EGFP-HA-Bla的全序列信息:D2814 pCMV-MCS-P2A-EGFP-HA-Bla全序列.txt。

保存条件：

-20℃保存。

注意事项：

本质粒未经碧云天书面许可不得用于任何商业用途，也不得移交给订货人所在实验室外的任何个人或单位。

本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。

为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。