pCMV-C-Myc-Pur

产品简介：
pCMV-C-Myc-Pur是碧云天自行研发的用于在哺乳动物细胞中表达C端带有Myc标签(Myc tag)的目的蛋白的表达质粒。该质粒含有CMV启动子可以高效启动目的蛋白在细胞中的表达；在多克隆位点的3′端含有一个编码Myc标签的序列，可以表达含有Myc标签的融合蛋白，因此可以方便地使用抗Myc的抗体来识别目的蛋白，从而有利于目的蛋白检测和分离纯化。

pCMV-C-Myc-Pur质粒为氨苄青霉素抗性和嘌呤霉素(Puromycin)抗性。可利用其氨苄青霉素抗性转化大肠杆菌后筛选阳性菌，而在转染哺乳动物细胞后，可利用其Puromycin抗性筛选稳定表达目的蛋白的细胞株。Puromycin (ST551)可以从碧云天购买。

Puromycin是来源于白黑链霉菌的一种氨基苷类抗生素，可通过打乱核糖体上的肽转运，造成翻译过程中不成熟终止，从而抑制蛋白质合成，抑制或杀死细胞。链霉菌(Streptomyces alboniger)来源的pac基因所编码的嘌呤霉素N-乙酰转移酶 (Puromycin N-acetyl-tranferase)可以催化Puromycin发生乙酰化修饰而失活，使细胞对Puromycin产生抗性。因此，Puromycin可用来筛选成功转染携带Puromycin抗性基因质粒的原核或真核细胞。

Puromycin是一种强效翻译抑制剂，作用迅速。一般2天内可以杀死99%的不表达pac基因的细胞，通常可在不到一周的时间内即可筛选到具有Puromycin抗性的稳定哺乳动物细胞系。推荐工作浓度范围为0.5-5μg/ml，实际使用时应针对不同的细胞系测试Puromycin的浓度梯度，以确定最佳使用浓度。

pCMV-C-Myc-Pur质粒(5162bp)的图谱如下：

pCMV-C-Myc-Pur质粒的主要信息如下：

Feature Nucleotide	Position
Ampicillin resistance ORF	63-923
CMV promoter	1405-1608
T3 promoter and T3 primer binding site	1654-1672
myc epitope	1775-1804
Multiple cloning site (SacI-XbaI)	1685-1774
T7 promoter and T7 primer binding site	1859-1877
SV40 polyA signal	2151-2272
f1 origin of ss-DNA replication	2279-2734
SV40 promoter	2867-3224
Puromycin resistance ORF	3259-3858
HSV-thymidine kinase (TK) polyA signal	4090-4137
pUC origin	4466-5054

pCMV-C-Myc-Pur的多克隆位点的详细图谱见说明书

pCMV-C-Myc-Pur中没有的酶切位点(Restriction enzymes that do not cut pCMV-C-Myc-Pur)包括：

Afe I	AflII	Age I	Asc I	AsiS I	Bae I
Bbs I	BbvC I	Blp I	BmgB I	Bsg I	BspQ I
BsrG I	BstZ17 I	EcoN I	Fse I	Nru I	PflM I
Pme I	Pml I	PpuM I	PshA I	PspX I	Sap I
Sbf I	SgrA I	Spe I	Swa I	Xcm I

pCMV-C-Myc-Pur中的单酶切位点(Restriction enzymes that cut pCMV-C-Myc-Pur once)包括：

AccI	GT`MK,AC	1752	HpaI	GTT|AAC	2150
AhdI	GACNN,N`NNGTC	135	MfeI	C`AATT,G	2137
AleI	CACNN|NNGTG	1695	MluI	A`CGCG,T	2273
ApaI	G,GGCC`C	1808	MscI	TGG|CCA	3634
BamHI	G`GATC,C	1721	NdeI	CA`TA,TG	1274
BclI	T`GATC,A	2044	NheI	G`CTAG,C	1631
BfuAI	ACCTGCNNNN`NNNN	3910	NotI	GC`GGCC,GC	1702
BglII	A`GATC,T	1757	PaeR7I	C`TCGA,G	1763
BmtI	G,CTAG`C	1631	PciI	A`CATG,T	5110
Bpu10I	CC`TNA,GC	3855	PflFI	GACN`N,NGTC	3301
BseRI	GAGGAG(N)8,NN	3203	PspOMI	G`GGCC,C	1808
BsiWI	C`GTAC,G	3315	PstI	C,TGCA`G	1733
BsmBI	CGTCTCN`NNNN	3651	PvuII	CAG|CTG	2885
BspDI	AT`CG,AT	3227	RsrII	CG`GWC,CG	3375
BspEI	T`CCGG,A	3372	SacI	G,AGCT`C	1685
BspMI	ACCTGCNNNN`NNNN	3910	SalI	G`TCGA,C	1751
BssHII	G`CGCG,C	3714	ScaI	AGT|ACT	616
BstBI	TT`CG,AA	3874	SfiI	GGCCN,NNN`NGGCC	3159
BstEII	G`GTNAC,C	3393	SmaI	CCC|GGG	1716
BstXI	CCAN,NNNN`NTGG	1693	SnaBI	TAC|GTA	1380
ClaI	AT`CG,AT	3227	SrfI	GCCC|GGGC	1716
CspCI	NN`(N)11CAA(N)5GTGG(N)10,NN`	1414	TspMI	C`CCGG,G	1714
Eco53kI	GAG|CTC	1687	Tth111I	GACN`N,NGTC	3301
EcoRI	G`AATT,C	1739	XbaI	T`CTAG,A	1769
EcoRV	GAT|ATC	1747	XhoI	C`TCGA,G	1763
Esp3I	CGTCTCN`NNNN	3651	XmaI	C`CCGG,G	1714
HindIII	A`AGCT,T	1727	XmnI	GAANN|NNTTC	735

pCMV-C-Myc-Pur质粒中对插入片段进行测序时，推荐使用的正向测序引物T3和反向测序引物T7的序列如下：

T3 primer (1654-1672): 5'AATTAACCCTCACTAAAGG 3'

T7 primer (1859-1877): 5'TAATACGACTCACTATAGG 3'

pCMV-C-Myc-Pur的全序列信息:D2794 pCMV-C-Myc-Pur-seq.txt

保存条件：

-20℃保存。

注意事项：

本质粒未经碧云天书面许可不得用于任何商业用途，也不得移交给订货人所在实验室外的任何个人或单位。

本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。

为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。