- ￥888 - 1169
- 碧云天（beyotime）
- 国产
- D2784
- 2025年07月13日
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- 详细信息
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- 技术资料
- 保存条件：
零下20℃
- 保质期：
至少一年有效
- 库存：
现货
- 供应商：
上海经科化学科技有限公司
- 规格：
1μg/100μg
| 规格： | 1μg | 产品价格： | ￥888.0 |
|---|---|---|---|
| 规格： | 100μg | 产品价格： | ￥1169.0 |
产品简介：
pCMV-N-HA-Zeo是碧云天自行研发的用于在哺乳动物细胞中表达N端带有HA标签(HA Tag, YPYDVPDYA)的目的蛋白的表达质粒。该质粒含有CMV启动子可以高效启动目的蛋白在细胞中的表达；在多克隆位点的5′端含有一个编码HA标签的序列，可以表达含有HA标签的融合蛋白，因此可以方便地使用抗HA的抗体来识别目的蛋白，从而有利于目的蛋白的检测和分离纯化。
pCMV-N-HA-Zeo质粒为氨苄青霉素抗性和Zeocin(博来霉素)抗性。可利用其氨苄青霉素抗性转化大肠杆菌后筛选阳性菌，而在转染细胞后，可利用其Zeocin抗性筛选稳定表达目的蛋白的细胞株。Zeocin (ST1450)可以从碧云天购买。
Zeocin是来源于轮枝链霉素(Streptomyces verticillus)的一种碱性、水溶性、铜离子螯合的糖肽抗生素。当Zeocin进入细胞后，与其螯合的Cu2+被还原并被细胞内巯基化合物去除，导致Zeocin被活化，嵌入细胞DNA使其断裂，并最终导致细胞死亡。印度链异壁菌(Streptoalloteichus hindustanus)来源的Sh ble基因编码一种14kDa大小的蛋白，能够以化学计量方式结合Zeocin，抑制其DNA双链断裂活性，使细胞对Zeocin产生抗性。因此，Zeocin可用来筛选成功转染携带Sh ble基因质粒的原核或真核细胞。
Zeocin筛选浓度范围为50-1000μg/ml，实际使用时应针对不同的细胞系测试Zeocin的浓度梯度，以确定最佳使用浓度。
pCMV-N-HA-Zeo质粒(4937bp)的图谱如下：
pCMV-N-HA-Zeo质粒的主要信息如下：
| Feature Nucleotide | Position |
| Ampicillin resistance ORF | 63-923 |
| CMV promoter | 1405-1608 |
| T3 promoter and T3 primer binding site | 1654-1672 |
| HA tag | 1712-1738 |
| Multiple cloning site (XmaI-ApaI) | 1741-1813 |
| T7 promoter and T7 primer binding site | 1859-1877 |
| SV40 polyA signal | 2151-2272 |
| f1 origin of ss-DNA replication | 2279-2734 |
| SV40 promoter | 2867-3224 |
| Zeocin™ resistance ORF | 3259-3633 |
| HSV-thymidine kinase (TK) polyA signal | 3865-3912 |
| pUC origin | 4241-4829 |
pCMV-N-HA-Zeo的多克隆位点的详细图谱见说明书
pCMV-N-HA-Zeo中没有的酶切位点(Restriction enzymes that do not cut pCMV-N-HA-Zeo)包括：
| Afe I | Afl II | Age I | Ale I | Asc I | AsiS I |
| Bae I | Bbs I | BbvC I | Blp I | Bpu10 I | Bsg I |
| BsiW I | BsmB I | BspE I | BspQ I | BsrG I | BstE II |
| BstX I | BstZ17 I | EcoN I | Esp3 I | Kas I | Nar I |
| Nru I | PflF I | PluT I | Pme I | Pml I | PpuM I |
| PshA I | PspX I | Rsr II | Sac II | Sap I | Sbf I |
| Sfo I | Swa I | Tth111 I | Xcm I |
pCMV-N-HA-Zeo中的单酶切位点(Restriction enzymes that cut pCMV-N-HA-Zeo once)包括：
| AccI | GT`MK,AC | 1779 | MscI | TGG|CCA | 3262 |
| AhdI | GACNN,N`NNGTC | 135 | NdeI | CA`TA,TG | 1274 |
| ApaI | G,GGCC`C | 1808 | NotI | GC`GGCC,GC | 1701 |
| BamHI | G`GATC,C | 1748 | PaeR7I | C`TCGA,G | 1790 |
| BcgI | NN`(N)10CGA(N)6TGC(N)10,NN` | 639 | PciI | A`CATG,T | 4885 |
| BclI | T`GATC,A | 2044 | PflMI | CCAN,NNN`NTGG | 1693 |
| BfuAI | ACCTGCNNNN`NNNN | 3685 | PspOMI | G`GGCC,C | 1808 |
| BglII | A`GATC,T | 1784 | PstI | C,TGCA`G | 1760 |
| BmgBI | CAC|GTC | 3393 | PvuII | CAG|CTG | 2885 |
| BspDI | AT`CG,AT | 3227 | SacI | G,AGCT`C | 1685 |
| BspMI | ACCTGCNNNN`NNNN | 3685 | SalI | G`TCGA,C | 1778 |
| BssHII | G`CGCG,C | 3295 | ScaI | AGT|ACT | 616 |
| BstBI | TT`CG,AA | 3649 | SfiI | GGCCN,NNN`NGGCC | 3159 |
| ClaI | AT`CG,AT | 3227 | SgrAI | CR`CCGG,YG | 3373 |
| CspCI | NN`(N)11CAA(N)5GTGG(N)10,NN` | 1414 | SmaI | CCC|GGG | 1743 |
| EarI | CTCTTCN`NNN, | 931 | SnaBI | TAC|GTA | 1380 |
| Eco53kI | GAG|CTC | 1687 | SpeI | A`CTAG,T | 1802 |
| EcoRI | G`AATT,C | 1766 | SrfI | GCCC|GGGC | 1743 |
| EcoRV | GAT|ATC | 1774 | StuI | AGG|CCT | 3208 |
| FseI | GG,CCGG`CC | 3531 | TspMI | C`CCGG,G | 1741 |
| HindIII | A`AGCT,T | 1754 | XbaI | T`CTAG,A | 1796 |
| HpaI | GTT|AAC | 2150 | XhoI | C`TCGA,G | 1790 |
| MfeI | C`AATT,G | 2137 | XmaI | C`CCGG,G | 1741 |
| MluI | A`CGCG,T | 2273 | XmnI | GAANN|NNTTC | 735 |
pCMV-N-HA-Zeo质粒中对插入片段进行测序时，推荐使用的正向测序引物T3和反向测序引物T7的序列如下：
T3 primer (1654-1672): 5' AATTAACCCTCACTAAAGG 3'
T7 primer (1859-1877): 5' TAATACGACTCACTATAGG 3'
pCMV-N-HA-Zeo的全序列信息:D2784 pCMV-N-HA-Zeo-seq.txt
保存条件：
-20℃保存。
注意事项：
本质粒未经碧云天书面许可不得用于任何商业用途，也不得移交给订货人所在实验室外的任何个人或单位。
本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
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文献和实验pCF-T M13F M13R pCI T7（17Base） 此载体无反向引物 pCI-neo T7（17Base） T3 pCMS-EGFP T7 T3 pCMV-3Tag-4A T3 /PFLAG-CMV-F T7 pCMV5 pCMV5F pCMV5R pCMV5-Flag pCMV5F pCMV5R pCMV-MYC/HA pCMV-F pCMV-R pCMV-Sport M13F/T7 SP6/M13R pCMV-Tag(KAN+) T3 T7 pCR2.1-TOPO
) ，Neo(G418)，Zeo，Hygro，其中Puro和BSR是较常用的真核抗性。真核抗性常用于稳定株筛选等过程，具体使用抗性筛选的浓度可通过空细胞抗性预实验确认，浓度梯度可根据抗生素说明书推荐浓度范围设置。(4)蛋白标签：蛋白标签（protein tag）：与目的蛋白一起融合表达的一种多肽或者蛋白，以便于目的蛋白的表达、检测、示踪和纯化等。常见标签：3xFLAG，6xHis，HA，Myc ，OLLAS，GST等。需注意目的蛋白是否有功能肽如信号肽，前肽等，蛋白标签需要融合无功能肽的一端
5-His(_A,_B,_C)T7/CMV-ProforBGH rev/V5revpcDNA3.1/Hygro(+,-)T7/CMV-ProforBGH rev/V5revpcDNA3.1/Zeo(+.-)T7BGHrevpcDNA3.3TOPOTACMV-ProforTKPAreversepcDNA4/HisMax(_A,_B,_C)XpressforBGH revpcDNA4/HisMax-TOPOXpressforBGH revpcDNA4/HisMax-TOPO/lacZXpressforBGH
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