pCMV-N-HA-Bla

产品简介：
pCMV-N-HA-Bla是碧云天自行研发的用于在哺乳动物细胞中表达N端带有HA标签(HA Tag, YPYDVPDYA)的目的蛋白的表达质粒。该质粒含有CMV启动子可以高效启动目的蛋白在细胞中的表达；在多克隆位点的5′端含有一个编码HA标签的序列，可以表达带有HA标签的融合蛋白，因此可以方便地利用抗HA的抗体来识别目的蛋白，从而有利于目的蛋白检测和分离纯化。

pCMV-N-HA-Bla质粒为氨苄青霉素抗性和灭瘟素S (Blasticidin S)抗性，可利用其氨苄青霉素抗性转化大肠杆菌后筛选阳性菌；而在转染哺乳动物细胞后，可利用其Blasticidin S抗性筛选稳定表达目的蛋白的细胞株。Blasticidin S (ST018)可以从碧云天购买。

Blasticidin S是来源于灰色链霉菌(Streptomyces griseochromogenes)的一种核苷类抗生素，中文名为灭瘟素S、杀稻瘟菌素S或稻瘟散。Blasticidin S特异性地抑制原核细胞或真核细胞的蛋白质合成，从而杀死细胞。Blasticidin S抗性基因(bsr/BSD/bls)所编码的Blasticidin S脱氨酶可以催化Blasticidin S发生脱氨基反应生成对细胞无毒性的Blasticidin S脱氨羟基化衍生物，从而使细胞对Blasticidin S产生抗性。因此，Blasticidin S可用于筛选携带bsr/BSD/bls基因(常标记为bsr^r/bsd^r/Blast^r)质粒的哺乳动物稳定转染细胞株，也可用于大肠杆菌等原核细胞的筛选。

Blasticidin S具有快速而强效的作用模式，通常可在不到一周的时间内即可筛选到具有Blasticidin S抗性的稳定哺乳动物细胞系。工作浓度范围1-50μg/ml，通常建议使用10μg/ml的浓度进行稳定哺乳动物细胞株的筛选，实际使用时应针对不同的细胞系测试Blasticidin S的浓度梯度，以确定最佳使用浓度。

pCMV-N-HA-Bla质粒(4961bp)的图谱如下：

pCMV-N-HA-Bla质粒的主要信息如下：

Feature Nucleotide	Position
Ampicillin resistance ORF	63-923
CMV promoter	1405-1608
T3 promoter and T3 primer binding site	1654-1672
HA tag	1712-1738
Multiple cloning site (XmaI-ApaI)	1741-1813
T7 promoter and T7 primer binding site	1859-1877
SV40 polyA signal	2151-2272
f1 origin of ss-DNA replication	2279-2734
SV40 promoter	2867-3224
Blasticidin resistance ORF	3259-3657
HSV-thymidine kinase (TK) polyA signal	3889-3936
pUC origin	4265-4853

pCMV-N-HA-Bla的多克隆位点的详细图谱见说明书

pCMV-N-HA-Bla中没有的酶切位点(Restriction enzymes that do not cut pCMV-N-HA-Bla)包括：

Afe I	Afl II	Age I	Ale I	Asc I	AsiS I
Bae I	BbvC I	BmgB I	Bpu10 I	BsiW I	BsmB I
BspE I	BspQ I	BsrG I	BssH II	BstE II	BstX I
BstZ17 I	EcoN I	Esp3 I	Fse I	Kas I	Nar I
PflF I	PluT I	Pme I	Pml I	PshA I	PspX I
Rsr II	Sac II	Sap I	Sbf I	Sfo I	SgrA I
Swa I	Tth111 I	Xcm I

pCMV-N-HA-Bla中的单酶切位点(Restriction enzymes that cut pCMV-N-HA-Bla once)包括：

AccI	GT`MK,AC	1779	MscI	TGG|CCA	3262
AhdI	GACNN,N`NNGTC	135	NdeI	CA`TA,TG	1274
ApaI	G,GGCC`C	1808	NotI	GC`GGCC,GC	1701
BamHI	G`GATC,C	1748	NruI	TCG|CGA	3490
BbsI	GAAGACNN`NNNN,	3344	PaeR7I	C`TCGA,G	1790
BcgI	NN`(N)10CGA(N)6TGC(N)10,NN`	639	PciI	A`CATG,T	4909
BclI	T`GATC,A	2044	PflMI	CCAN,NNN`NTGG	1693
BfuAI	ACCTGCNNNN`NNNN,	3709	PpuMI	RG`GWC,CY	3418
BglII	A`GATC,T	1784	PspOMI	G`GGCC,C	1808
BlpI	GC`TNA,GC	3654	PstI	C,TGCA`G	1760
BsaXI	NNN`(N)9AC(N)5CTCC(N)7,NNN`	2434	SacI	G,AGCT`C	1685
BseRI	GAGGAG(N)8,NN`	3203	SalI	G`TCGA,C	1778
BsgI	GTGCAG(N)14,NN`	3444	ScaI	AGT|ACT	616
BspDI	AT`CG,AT	3227	SfiI	GGCCN,NNN`NGGCC	3159
BspMI	ACCTGCNNNN`NNNN,	3709	SmaI	CCC|GGG	1743
BstBI	TT`CG,AA	3673	SnaBI	TAC|GTA	1380
ClaI	AT`CG,AT	3227	SpeI	A`CTAG,T	1802
EarI	CTCTTCN`NNN,	931	SrfI	GCCC|GGGC	1743
Eco53kI	GAG|CTC	1687	StuI	AGG|CCT	3208
EcoRI	G`AATT,C	1766	TspMI	C`CCGG,G	1741
EcoRV	GAT|ATC	1774	XbaI	T`CTAG,A	1796
HindIII	A`AGCT,T	1754	XhoI	C`TCGA,G	1790
HpaI	GTT|AAC	2150	XmaI	C`CCGG,G	1741
MfeI	C`AATT,G	2137	XmnI	GAANN|NNTTC	735
MluI	A`CGCG,T	2273

pCMV-N-HA-Bla质粒中对插入片段进行测序时，推荐使用的正向测序引物T3和反向测序引物T7的序列如下：

T3 primer (1654-1672): 5' AATTAACCCTCACTAAAGG 3'

T7 primer (1859-1877): 5' TAATACGACTCACTATAGG 3'

pCMV-N-HA-Bla的全序列信息:D2772 pCMV-N-HA-Bla-seq.txt

保存条件：

-20℃保存。

注意事项：

本质粒未经碧云天书面许可不得用于任何商业用途，也不得移交给订货人所在实验室外的任何个人或单位。

本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。

为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。