pET-Dual-N-GST

产品简介：
pET-Dual-N-GST是一种用于在大肠杆菌中高效共表达两种目的蛋白的质粒，其中一种蛋白可以带上GST标签(Glutathione S-transferase tag, GST tag)。本质粒包含两个多克隆位点(MCS)，每个多克隆位点前都有一个T7启动子/lac操作子和一个核糖体结合位点 (rbs)，因此都可以在异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)的诱导下高效启动目的蛋白的表达。本质粒为氨苄青霉素抗性。
      在共表达两个蛋白的复合物时，通常宜把较难表达的基因克隆到第一个多克隆位点，并在其N端引物设计时加入PreScission蛋白酶识别的八肽序列(LEVLFQGP)，宜把较易表达的基因克隆到第二个多克隆位点。这样通过GST柱纯化，可分离纯化获得带有GST标签的蛋白复合物，配合使用碧云天生产的PreScission Protease (P2302/P2303) 4℃酶切过夜，第二天收集穿柱液即可获得蛋白复合物，这为后续进行蛋白复合物的功能检测、蛋白结晶等工作带来了极大的便利。PreScission蛋白酶酶切发生在八肽序列的Q和G之间，因此在酶切去除GST标签的时候会在目的蛋白的N端留下两个额外的氨基酸残基GP。当然，本质粒也可以只在第一个多克隆位点插入目的基因，这样就会仅表达一个含有N端GST标签的目的蛋白。
      pET-Dual-N-GST质粒的主要信息如下：

Feature Nucleotide	Position
T7 transcription start-1	1
GST-taq coding sequence	71-727
Multiple cloning sites-1(BamH I – NotI)	730-780
T7 promoter-2	838-854
T7 transcription start-2	855
Multiple cloing sites-2(Nde I – XhoI)	922-983
S Tag coding sequence	990-1034
T7 terminator	1086-1133
f1 origin	1171-1618
bla(Ap) coding sequence	1743-2600
pBR322 origin	3361
lacI coding sequence	4555-5637
T7 promoter-1	6028-6044

      pET-Dual-N-GST质粒(6044bp)的图谱如下：

pET-Dual-N-GST质粒的详细图谱见说明书

      pET-Dual-N-GST中没有的酶切位点(Restriction enzymes that do not cut pET-Dual-N-GST)包括：

AgeI	AleI	BbvCI	BmgBI	BmtI	BseRI	BsiWI
BsmI	Bsu36I	CspCI	NheI	NruI	NsiI	PmeI
PmlI	PspAI	RsrII	SacII	SexAI	SfiI	SmaI
SnaBI	SpeI	SrfI	StuI	TspMI	XmaI

      pET-Dual-N-GST中的单酶切位点(Restriction enzymes that cut pET-Dual-N-GST once)包括：

XbaI	T`CTAG,A	30	AvaI	C`YCGR,G	978
NcoI	C`CATG,G	69	PaeR7I	C`TCGA,G	978
MscI	TGG|CCA	281	XhoI	C`TCGA,G	978
BstBI	TT`CG,AA	471	AvrII	C`CTAG,G	1057
SwaI	ATTT|AAAT	501	BlpI	GC`TNA,GC	1075
BamHI	G`GATC,C	730	DraIII	CAC,NNN`GTG	1404
EcoRI	G`AATT,C	736	PsiI	TTA|TAA	1528
Eco53kI	GAG|CTC	744	SspI	AAT|ATT	1608
SacI	G,AGCT`C	742	AhdI	GACNN,N`NNGTC	1812
BfuAI	ACCTGCNNNN`NNNN,	748	BsaI	GGTCTCN`NNNN,	1874
BspMI	ACCTGCNNNN`NNNN,	748	BglI	GCCN,NNN`NGGC	1930
AscI	GG`CGCG,CC	749	FspI	TGC|GCA	2035
PstI	C,TGCA`G	755	AlwNI	CAG,NNN`CTG	3006
SalI	G`TCGA,C	761	BstZ17I	GTA|TAC	3651
HindIII	A`AGCT,T	767	Tth111I	GACN`N,NGTC	3676
NotI	GC`GGCC,GC	774	PflFI	GACN`N,NGTC	3676
AflII	C`TTAA,G	787	Bpu10I	CC`TNA,GC	4313
BsrGI	T`GTAC,A	814	PpuMI	RG`GWC,CY	4413
NdeI	CA`TA,TG	922	HpaI	GTT|AAC	4780
BglII	A`GATC,T	929	PspoMI	G`GGCC,C	5075
MunI	C`AATT,G	935	ApaI	G,GGCC`C	5075
EcoRV	GAT|ATC	943	BstEII	G`GTNAC,C	5100
FseI	GG,CCGG`CC	948	MluI	A`CGCG,T	5282
AsiSI	GCG,AT`CGC	959	BstAPI	GCAN,NNN`NTGC	5603
ZraI	GAC|GTC	968	SphI	G,CATG`C	5811
AatII	G,ACGT`C	966	SgrAI	CR`CCGG,YG	5963
Acc65I	G`GTAC,C	972	BspDI	AT`CG,AT	6007
KpnI	G,GTAC`C	972	ClaI	AT`CG,AT	6007
PspXI	VC`TCGA,GB	978

      pET-Dual-N-GST质粒中推荐使用的测序引物序列如下：
      MCS1-N Primer (626-647): 5′-GCTATCCCACAAATTGATAAGT-3′
      MCS1-C Primer (832-813): 5′-GATTATGCGGCCGTGTACAA-3′
      MCS2-N Primer (813-832): 5′-TTGTACACGGCCGCATAATC-3′
      pET-Dual-N-GST的全序列信息：D2931 pET-Dual-N-GST.txt。
      不同原核表达质粒的比较和选择，以及标签、蛋白酶切位点和蛋白共表达的考虑可以参考如下网页：

保存条件：
      -20℃保存。

注意事项：
      本质粒未经碧云天书面许可不得用于任何商业用途，也不得移交给订货人所在实验室外的任何个人或单位。
      本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
      为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。