pET-N-His-Thrombin-C-His

产品简介：
pET-N-His-Thrombin-C-His是一种用于表达N端或C端含有His标签(His tag)的目的蛋白的原核表达质粒，也可以用于表达N端和C端都含有His标签的目的蛋白。本质粒N端His标签后有Thrombin酶切位点，可通过Thrombin蛋白酶切除N端的His标签。本质粒为卡那霉素抗性。
本质粒含有T7启动子/lac操纵子，可以在异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)的诱导下高效启动目的蛋白表达。在多克隆位点的前面和后面，各有一个His标签的编码序列，每个His标签编码6个组氨酸(6X His)。在多克隆位点按照读码框插入目的基因并带上终止密码子，就可以表达仅N端带有His标签的目的蛋白，如果在NdeI和多克隆酶切位点之间按照读码框插入不带有终止密码子的目的基因，这样就可以表达仅C端带有His标签的目的蛋白，如果在多克隆位点按照读码框插入不带有终止密码子的目的基因，这样就可以表达N端和C端都带有His标签的目的蛋白。
本载体在N端His标签与多克隆位点之间含有Thrombin蛋白酶识别的6肽序列LVPRGS，对应核酸序列为CTGGTGCCACGCGGTTCT，因此在目的蛋白纯化后可以用Thrombin切除N端的His标签。Thrombin蛋白酶酶切发生在六肽序列的R和G之间，因此在酶切去除His标签的时候会在目的蛋白的N端留下两个额外的氨基酸残基GS。
通常可以采用如BeyoGold™ His-tag Purification Resin (P2210/P2218/P2220)或His标签蛋白纯化试剂盒(P2226)等纯化本质粒表达的目的蛋白，也可以使用His-tag抗体(AH367)检测和少量地分离纯化目的蛋白。
pET-N-His-Thrombin-C-His质粒的主要信息如下：

Feature Nucleotide	Position
f1 origin	12-467
Kanamycin resistance ORF	563-1645
PBR 322 origin	2084
LacI coding sequence	3518-4597
T7 promoter	4988-5004
His tag coding sequence	5079-5096
Thrombin recognition site sequence	5097-5129
Multiple cloning site(BamHI-XhoI)	5130-5177
His tag coding sequence	5178-5195
T7 Terminator	5263-5309

pET-N-His-Thrombin-C-His质粒(5334bp)的图谱如下：

pET-N-His-Thrombin-C-His质粒的详细图谱见说明书

pET-N-His-Thrombin-C-His中没有的酶切位点(Restriction enzymes that do not cut pET-N-His-Thrombin-C-His)包括：

AatII	Acc65I	AflII	AgeI	AhdI	AleI	AscI
AvrII	BaeI	BbvCI	BfuAI	BmgBI	BmtI	BsaI
BseRI	BsiWI	BspMI	BsrGI	BstBI	Bsu36I	CspCI
DraI	EagI	Eco53kI	FseI	KpnI	MfeI	MscI
NcoI	NheI	NotI	PacI	PmeI	PmlI	PspXI
RsrII	SacI	SacII	SbfI	ScaI	SexAI	SfiI
SnaBI	SpeI	SrfI	StuI	SwaI	ZraI

pET-N-His-Thrombin-C-His中的单酶切位点(Restriction enzymes that cut pET-N-His-Thrombin-C-His once)包括：

DraIII	CAC,NNN`GTG	242	PspOMI	G`GGCC,C	4035
PsiI	TTA|TAA	370	NmeAIII	GCCGAG(N)19,NN`	4041
PvuI	CG,AT`CG	943	BstEII	G`GTNAC,C	4060
AsiSI	GCG,AT`CGC	943	MluI	A`CGCG,T	4242
TspMI	C`CCGG,G	1067	BstAPI	GCAN,NNN`NTGC	4563
XmaI	C`CCGG,G	1067	SphI	G,CATG`C	4771
SmaI	CCC|GGG	1069	SgrAI	CR`CCGG,YG	4923
NruI	TCG|CGA	1286	SgrAI	CR`CCGG,YG	4923
AcuI	CTGAAG(N)14,NN`	1597	XbaI	T`CTAG,A	5034
AlwNI	CAG,NNN`CTG	1729	NdeI	CA`TA,TG	5074
BssSI	C`ACGA,G	1968	BamHI	G`GATC,C	5130
BstZ17I	GTA|TAC	2374	HindIII	A`AGCT,T	5136
Tth111I	GACN`N,NGTC	2399	PstI	C,TGCA`G	5142
PflFI	GACN`N,NGTC	2399	EcoRI	G`AATT,C	5148
PpuMI	RG`GWC,CY	3136	EcoRV	GAT|ATC	5156
FspI	TGC|GCA	3164	SalI	G`TCGA,C	5160
BglI	GCCN,NNN`NGGC	3182	BglII	A`GATC,T	5166
PshAI	GACNN|NNGTC	3401	XhoI	C`TCGA,G	5172
HpaI	GTT|AAC	3740	PaeR7I	C`TCGA,G	5172
BssHII	G`CGCG,C	3831	BlpI	GC`TNA,GC	5251
ApaI	G,GGCC`C	4035	StyI	C`CWWG,G	5273

pET-N-His-Thrombin-C-His质粒中推荐使用的测序引物序列如下：
T7 primer (4988-5004): 5′-TAATACGACTCACTATA-3′
pET-R primer (5248-5267): 5′-TGCTAGTTATTGCTCAGCGG-3′
pET-N-His-Thrombin-C-His的全序列信息：D2908 pET-N-His-Trombin-C-His.txt。
不同原核表达质粒的比较和选择，以及标签、蛋白酶切位点和蛋白共表达的考虑可以参考如下网页：

保存条件：
-20℃保存。

注意事项：
本质粒未经碧云天书面许可不得用于任何商业用途，也不得移交给订货人所在实验室外的任何个人或单位。
本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。