Sigma18909-100ML-F,卡尔科弗卢尔荧光增白剂

浅谈高效液相色谱法(HighperformanceLiquidChromatography，HPLC)

液相色谱法。     1.1 试剂：1荧光增白剂标准液33号0.1g，加水溶解，定容至100mL，（含荧光增白剂1.0mg/ml）2棕色瓶中保存使用时吸取上述标准溶液10mL，置于100mL容量瓶中，加水稀释至刻度（相当于0.1mg/ml荧光增白剂）3甲醇     1.2 仪器条件：流动相100%甲醇，测定波长365nm；流速灵敏度1.0AUFS     1.3 操作步骤提取：将样品粉碎，称取5.0-10.0g于具塞三角瓶中，加50ml水，电动振荡器振荡30分钟后，调节pH至中性，定容

根分生细胞核蛋白质提取

提取，NSB 含有 1% ( V/V ) Nonidet NP-40  (Roche) 和 0.5% ( V/V ) 脱氧胆酸钠（Sigma) 。 ( 2 ) 可溶性馏分（S2 ) (图 8-1，S2 )：第二份馏分用低离子强度缓冲液提取，这种缓冲液含有 10 mmol/L  Tris-HCl  ( pH 8.0 ) 和 1 mmol/L EDTA。 ( 3 ) 染色质馏分（图 8-1， Chr)：为了提取第三份馏分，使用的缓冲液由 NSB 组成 ，其中含有 100 μg/ml 无 

大肠杆菌亮氨酰-tRNA合成酶E292对于氨基酰化活性的作用

双酶切后，嵌入表达载体pTrc-99B的NcoI和HindIII两个酶切位点间的切口内。得到的LeuRS 6个变种酶基因的正确性用DNA测序证实。 2. LeuRS及其变种酶基因的表达和纯化     1) 将含有LeuRS及其六个变种酶LeuRS-E292K，LeuRS-E292F，LeuRS-E292S，LeuRS-E292D，LeuRS-E292Q，LeuRS-E292A的基因的重组质粒转化到在大肠杆菌菌株TG1中，挑选含有正确质粒的转化子至5 mL氨节