- ￥647.32
- Sigma
- 美国
- P5147-100mg
- 2025年07月06日
企业认证
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
-20°-20°
- 保质期：
1-3年
- 库存：
999
- 供应商：
亦高生物
- CAS号：
9036-06-0
- 规格：
P5147-100mg
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文献和实验钠（CHCOONa-3H20）溶于100ml蒸馏水中，有结晶析出，取上清备用。 3mol乙酸钠（pH5.2） 无水乙醇 70%乙醇 2. 操作方法 ① 将20ml细胞裂解液加入到5ml抗凝血中，混匀，1000g离心10min，收集白细胞沉淀，再用10ml细胞裂解液重复一次； ② 加入8ml细胞核裂解液至白细胞沉淀中，混匀，3000g离心10min； ③ 收集沉淀，加入3ml白细胞核裂解液充分混匀； ④ 加250μl蛋白酶E（10mg/ml）和400
ml离心管以4000rpm离心10分钟，弃上清；加10倍体积TE洗一遍，以4000rpm离心10分钟，弃上清 ③ 加适量TE稀释 ④ 取400μl稀释液于1.5ml的Eppendorf管，缓慢加入10％SDS溶液，至终浓度0.5％ (加20μl)，摇匀直至溶液变粘稠 ⑤ 加入Rnase(200μg/ml)至终浓度20ug/ml(42μl)混匀，置37℃保温60分钟（总体积 420μl)。 ⑥ 加蛋白酶K(20mg/ml)至终浓度100ug/m1混匀(加21ul)，于50℃保温3小时
一、原理 DNA以核蛋白形式存在于细胞核中，制备DNA的原则是既要将DNA与蛋白质、脂类和糖类等分离，又要保持DNA分子的完整。蛋白酶K及链霉蛋白酶E的应用使这两个原则得到了保证。 蛋白酶K或链霉蛋白酶E均为广谱蛋白酶，其重要特性是能在SDS和EDTA存在下保持很高的活性。在匀浆后提取DNA的反应体系中，SDS可破坏细咆膜、核膜，并使组织蛋白与 DNA分子分离，EDTA抑制细胞中DNase活性，蛋白酶K或链霉蛋白酶E将蛋白质降解成小肽或氨基酸，使DNA分子完整地分离出来。再用酚
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