SW480-LUC/人结肠腺癌细胞-荧光素酶标记

一、基本信息

细胞名称

SW480-LUC/人结肠腺癌细胞-荧光素酶标记

细胞规格

1x10⁶cells/T25培养瓶或者1mL冻存管

种属来源

人

组织来源

结肠

细胞形态

上皮细胞样

细胞简介

Luciferase SW480细胞稳定表达萤火虫荧光素酶。该细胞株性状稳定，培养时不需要添加抗生素维持。可用作萤火虫荧光素酶活性检测中的阳性对照，也可用于活体动物成像实验。SW480细胞通过慢病毒转染的方式携带Luc基因。SW480源自原位直肠腺癌，和SW620细胞源自同一病人一年后的淋巴结转移。CSAp和直肠抗体3阴性；角蛋白免疫过氧化物酶染色阳性。p53基因第273位密码子的G→A突变引起Arg→His替代，309位密码子的C→T突变导致Pro→Ser替代。细胞p53蛋白表达水平提高，癌基因c-myc、K-ras、H-ras、N-ras、myb、sis和fos的表达呈阳性，癌基因N-myc的表达未做检测。SW480 [SW-480]细胞不表达细胞溶解酶，一种与肿瘤入侵相关的金属蛋白酶。有报道称，SW480 [SW-480]细胞表达GM-CSF。SW480 [SW-480]细胞ras原癌基因的12位密码子有一个突变，可以用作PCR法检测该突变的阳性对照。1978年11月，A·Leibovitz将其提交给ATCC时已传代至第91代。

puro药筛浓度

SW480细胞puro药筛浓度为1. 0ug/ml，培养过程中可不用再添加puro，如若担心抗性随着传代时间降低，可定期用0.5ug/ml浓度puro维持

生物安全等级

1

细胞代数

10代以内

保藏机构

ATCC; CCL-228 DSMZ; ACC-313 ECACC; 87092801

生长特性

贴壁生长

生长条件

气相：100%空气；温度：37℃

培 养 基

90%L-15+10% FBS+PS

冻存条件

无血清冻存液，液氮储存

细胞货期

现货，1周左右

供应范围

仅用于科研使用，不得用于其它用途

二、细胞培养操作

　Ｔ25瓶

收货处理

观察好细胞状态后，75%酒精消毒瓶壁，将T25瓶置于37度培养箱放置2-4h，以便稳定细胞状态

传代密度

细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养

传代比例

首次传代建议1：2传代，1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿。不是1个T25瓶传2个10cm皿

传代方法

a、弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。

b、加1 mL消化液（0.25%Trypsin-0.02% EDTA）于培养瓶中，使消化液浸润所有细胞，将培养瓶置于37℃培养箱中消化1-3min（视细胞情况而定），然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加2-3ml完全培养基终止消化。轻轻打匀后装入无菌离心管中，1000 rpm离心5 min，弃去上清液，补加1-2 mL培养液后吹匀。

c、将细胞悬液按1:2比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中，置于培养箱中培养。

注意事项

1. 运输用的培养基（灌液培养基）不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的完全培养基来培养细胞。

2. 因运输问题，部分细胞由于温度变化及剧烈碰撞死亡破碎形成碎片，是正常现象。

　冻存管

收货处理

到细胞后，需立即转入液氮冻存或直接复苏

传代密度

第二天换液并检查细胞密度

传代比例

一管细胞建议接种到10cm培养皿或者T25瓶

传代方法

将含有1 mL细胞悬液的冻存管在 37℃水浴中迅速摇晃解冻，加4 mL培养基混合均匀。在1000 rpm条件下离心3 min，弃去上清液，加1-2 mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入含适量培养基的培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入6 cm皿中，加入约4 mL培养基，培养过夜）第二天换液并检查细胞密度。

注意事项

1. 收货时若发现干冰化完，检查冻存管是否融化，若已融化需直接离心细胞接种观察，若未融化可以将细胞按正常步骤保存。

2. 为保证细胞的高存活率，收到产品后，请立即解冻复苏细胞。

三、细胞冻存操作

冻存液配方

无血清冻存液，液氮储存

细胞密度

待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。下面T25瓶为例

冻存方法

a、收集细胞及细胞培养液，装入无菌离心管中，1000 rpm条件下离心4 min，弃去上清液，用PBS清洗一遍，弃尽PBS，进行细胞计数。

b、根据细胞数量加入无血清细胞冻存液，使细胞密度5x106~1x107/mL，轻轻混匀，每支冻存管冻存1mL细胞悬液，注意冻存管做好标识。

c、将冻存管放入-80℃冰箱，24 h后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。

注意事项

冻存细胞转入液氮后及时复苏一管检查细胞冻存活性，若有异常，及时调整实验方案

四、售后服务

细胞予重发

1. 细胞运输中遭遇的各种问题，细胞丢失瓶身破损、培养液严重漏液等，重发。

2. 收到细胞未开封，如出现污染状况，重发。

3. 收到细胞3天内，发现污染问题，经核实后，重发。

4. 常温发货的细胞静置2小时后，干冰冻存发货的细胞复苏2天后，绝大多数细胞未存活，经核实后，重发。

5. 常温发货的细胞静置22小时并且未开封或干冰冻存发货的细胞复苏2天后，出现污染，经核实后，重发。

6. 细胞活性问题，请在收到产品3天内给我们提出真实的实验结果，用台盼蓝染色法鉴定细胞活力，经核实后，重发。

细胞不重发

1. 客户操作造成细胞污染，不重发。

2. 客户严重操作失误致细胞状态不好，不重发。

3. 非我们推荐细胞培养体系致的细胞状态不好，不重发。

4. 细胞状态不好，未提供真实清晰的培养前3天的细胞状态照片，不重发。

5. 细胞培养时经其它处理导致细胞出现问题的，不重发。

6. 收到细胞发现问题与客服人员沟通的时间证明大于3天的，不重发。