蓝白斑筛选Kit-1（即用型，Amp）

本 Kit 是 Solarbio 专为蓝白斑筛选设计的试剂盒。本套餐精选了 2 种经典的可用于蓝白斑筛选的基础试剂
和高品质的抗生素，旨在为客户构建“一站式服务平台”，省时省力省心。在库产品均通过生物安全检测和
产品质量检测，性能稳定有效、批间差异小、具有良好的生物活性，并且已有大量文献多方验证，品质可靠。
IPTG 为安慰性诱导物，X-gal 为生色底物，二者共同用于蓝白斑筛选。IPTG 可诱导载体 Lac 操纵子
DNA 区段合成β-半乳糖苷酶氨基端片段，该片段可与宿主细胞编码的缺陷型β-半乳糖苷酶实现基因内互补(α
互补)。实现α互补的细菌铺在含有 X-gal 生色底物的培养基上，可形成蓝色菌落。外源 DNA 插入质粒的多
克隆位点后可破坏α互补作用，将产生白色菌落。

产品组份：
试剂盒组份 规格 保存
试剂一 20mg/mL X-gal 1mL -20℃，避光
试剂二 50mg/mL IPTG 1mL -20℃，避光
试剂三 100mg/mL Amp 1mL -20℃，避光

注：
a. 本产品组分均为无菌规格，无需再进行除菌处理。
b. 在使用前，请瞬时离心各管小剂量试剂，以免损失。
产品特点
1. 本套装为即用型 Kit，无需客户再进行配制，可直接使用。灵活定制。
2. 灵活定制。客户可以根据自己的实验需求删减或添加其他所需的化合物，定制专属 Kit。也可以定制规格
和包装。
3. 库存充足，现货发送，性价比高。

使用说明（仅供参考）
直接加入培养基中使用（以 100mL 的含琼脂培养基为例）
1. 高压灭菌培养基，在超净台中冷却至 55℃左右（即：培养基摸着略烫手但未凝固）。
2. 在还未凝固的的培养基中，快速加入 500μL 的 试剂一、250μL 的试剂二和 100μL 的 试剂三，充分混
匀。
3. 倒平板，制作成含 X-Gal、IPTG 和 抗生素 的平板培养基。

注：a.不可以先加入 X-gal、IPTG 和 抗生素后，再去高压灭菌。

b.高压灭菌后的培养基必需冷却至 55℃以下时，才可以加入 X-gal、IPTG 和 抗生素。
直接加入平板上使用（以 90mM 的平板为例）
1. 高压灭菌含琼脂的培养基，在超净台中倒平板。
2. 待平板充分凝固后，在平板上加入 40μL 试剂一、16μL 试剂二、10μL 试剂三，充分涂布。
3. 待涂布的液体干后即可使用。
注：具体涂布用量可根据实验结果进行调整。

蓝白斑筛选
1. 细菌铺板后，37℃培养倒置平板过夜，可根据长出菌落的蓝白色，而方便地挑选出基因重组体。

注：白色菌落为具有 DNA 插入片段的基因重组体。
2. 过夜培养后，若显色不明显，可在 4℃冰箱中放置 1-2 h。一段时间后蓝白斑显示会比较明显，便于挑选。

注意事项
1. X-Gal、IPTG 和 抗生素均对温度敏感，高温会使其快速失活。
2. 本产品仅供科研使用。请勿用于医药、临床诊断或治疗，食品及化妆品等用途。
3. 请勿存放于普通住宅区。
4. 为了您的安全和健康，请穿好实验服并佩戴一次性手套和口罩操作。

常见问题

没有蓝斑
1. 载体处理的好，实验很成功，全是阳性克隆。
2. 使用的培养基含有乳糖或葡萄糖，因为半乳糖苷酶会分解乳糖，导致不能与 X-gal 反应，而葡萄糖不会
诱导融合基因的表达。

没有白斑
1. 外源目的基因没连接上，可能有外源目的基因的问题，如片段过大，或者是载体的问题。
2. 实验操作过程中抑菌做得不好，都是杂菌。
3. 插入的外源目的基因片段较短，且插入后的基因读码框恰好和 lacZ 基因相吻合。

无菌落生长
1. 感受态细胞状态不好，或操作过程中过于粗暴。
2. IPTG 使用浓度太高，IPTG 对菌体是有毒性的。
3. 抗生素使用浓度过高