A549/DDP人非小细胞肺癌细胞顺铂耐药株

一、基本信息

细胞名称

A549/DDP人非小细胞肺癌细胞顺铂耐药株

细胞规格

1×10⁶cells/T25培养瓶或者1mL冻存管包装

细胞来源

人

组织来源

肺

生长特征

贴壁生长

细胞形态

上皮细胞样

特别提醒

待细胞长到70-80%的汇合度时，去掉培养液，加入含 500ng/ml DDP 药物的培养液，放入培养箱，这段时间肯定会有小部分细胞悬浮起来，但是不要紧，通过换液可以去掉，下面的细胞待长满就可以消化传瓶了，这时可以一直用含药培养液来消化培养细胞，一两代之后可以将药物浓度提高到 1000ng/ml，含药培养液用于细胞培养都没问题的，冻存的时候就不要在冻存液里面加药物了。(注明：用不含药物培养基培养一周到两周，再用含药培养基培养。)

细胞代数

10代以内

细胞货期

现货，1周左右

培 养 基

90% DMEM+10% FBS+PS    

培养条件

气相：95%空气+5%二氧化碳；温度：37℃

冻存条件

无血清冻存液，液氮储存

供应范围

仅用于科研使用，不得用于其它用途

二、细胞培养操作

T25瓶

收货处理

用75%酒精擦拭细胞瓶表面，放37度培养箱内静置培养2-4h，以便稳定细胞状态

传代密度

细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养

传代比例

首次传代建议1:2传代，1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿。
是1个T25瓶传2个10cm皿

传代方法

1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。

2. 加1 mL消化液（0.25%Trypsin-0.02% EDTA）于培养瓶中，使消化液浸润所有细胞，将培养瓶置于37℃培养箱中消化2-5 min（视细胞情况而定），然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加2-3ml完全培养基终止消化。轻轻打匀后装入无菌离心管中，1000 rpm离心5 min，弃去上清液，补加1-2 mL培养液后吹匀。
3. 细胞悬液按1:2比例分到新的含8 ml培养基的新皿中或者瓶中，置于培养箱中培养。

注意事项

1. 运输用的培养基（灌液培养基）不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的完全培养基来培养细胞。

2. 因运输问题，部分细胞由于温度变化及剧烈碰撞死亡破碎形成碎片，是正常现象。

冻存管

初步平衡

收到细胞后，需立即转入液氮冻存或直接复苏

传代密度

第二天换液并检查细胞密度

传代比例

一管细胞建议接种到10cm培养皿或者T25瓶

传代方法

将含有1 mL细胞悬液的冻存管在 37℃水浴中迅速摇晃解冻，加4 mL培养基混合均匀。在1000 rpm条件下离心3 min，弃去上清液，加1-2 mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入含适量培养基的培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入6 cm皿中，加入约4 mL培养基，培养过夜）第二天换液并检查细胞密度。

注意事项

1. 收货时若发现干冰化完，检查冻存管是否融化，若已融化需直接离心细胞接种观察
若未融化可以将细胞按正常步骤保存。

2. 为保证细胞的高存活率，收到产品后，请立即解冻复苏细胞。

冻存

冻存液配方

无血清冻存液，液氮储存

细胞密度

待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存，以T25瓶为例。

三、售后服务

细胞予重发

1. 细胞运输中遭遇的各种问题，细胞丢失瓶身破损、培养液严重漏液等，重发。

2. 收到细胞未开封，如出现污染状况，重发。

3. 收到细胞3天内，发现污染问题，经核实后，重发。

4. 常温发货的细胞静置2小时后，干冰冻存发货的细胞复苏2天后，绝大多数细胞未存活，经核实后，重发。

5. 常温发货的细胞静置22小时并且未开封或干冰冻存发货的细胞复苏2天后，出现污染，经核实后，重发。

6. 细胞活性问题，请在收到产品3天内给我们提出真实的实验结果，用台盼蓝染色法鉴定细胞活力，经核实后，重发。

细胞不重发

1. 客户操作造成细胞污染，不重发。

2. 客户严重操作失误致细胞状态不好，不重发。

3. 非我们推荐细胞培养体系致的细胞状态不好，不重发。

4. 细胞状态不好，未提供真实清晰的培养前3天的细胞状态照片，不重发。

5. 细胞培养时经其它处理导致细胞出现问题的，不重发。

6. 收到细胞发现问题与客服人员沟通的时间证明大于3天的，不重发。