Recombinant Human 14-3-3 beta

重组蛋白的制备方法：
重组蛋白的制备涉及多个步骤，包括基因克隆、表达系统选择和蛋白纯化：
 基因克隆：基因克隆是将目标基因导入表达载体中的过程。研究人员可以选择不同的克隆方法，如限制性酶切克隆、PCR扩增克隆等，根据需要构建目标基因的DNA序列。
 表达系统选择：选择适合的表达系统是重组蛋白制备的关键一步。常用的表达系统包括大肠杆菌、酵母、昆虫细胞和哺乳动物细胞。每种表达系统都具有不同的优缺点，适用于不同类型的蛋白质表达。

商品属性：

货号	BJ-DB2384	种属	Human
宿主	E.Coli	表达区间	1-246
分子量	27 kDa	标签	N-terminal His Tag
应用	Western Blot, ELISA	规格	50μg、200ug、1mg
包装	盒装	分类	重组蛋白

商品介绍：
产品名称：Recombinant Human 14-3-3 beta
纯度：Greater than 95% as determined by SDS-PAGE
性状：Lyophilized from a 0.2 μm filtered solution in 10 mM Hepes, 500 mM NaCl with 5% trehalose, pH7.4
溶解方法：Centrifuge the vial at 10,000 rpm for 1 minute, reconstitute at 200 μg/ml in sterile distilled water by gentle pipetting 2-3 times, don’t vortex
存储：-20°C for 12 months as lyophilized; 2-8°C for 1 month under sterile conditions after reconstitution
别名：14 3 3 protein beta/alpha, 14-3-3 protein beta/alpha, 1433B_HUMAN, Brain protein 14 3 3 beta isoform, Epididymis secretory protein Li 1, GW128, HEL S 1, HS1, KCIP-1, KCIP1, N-terminally processed, Protein 1054, Protein kinase C inhibitor protein 1, Tyrosine 3 monooxygenase/tryptophan 5 monooxygenase activation protein beta polypeptide, YWHAA, YWHAB
蛋白表达检测方法主要有以下几种：
1、免疫印迹法：免疫印迹法是一种常用的蛋白质表达检测方法，它基于抗体和目标蛋白结合的特异性，通过电泳将样品中的蛋白质分离并转移到膜上，然后使用特异性抗体与目标蛋白结合，最后用化学或光学方法检测结合信号，这种方法可以精确定量目标蛋白的表达水平。
2、免疫组织化学法：免疫组织化学是在组织切片上使用抗体来检测目标蛋白的方法。它通过特异性抗体与目标蛋白在组织切片上的结合来定位和定量目标蛋白在组织中的表达情况。该方法常用于病理诊断和研究特定蛋白在组织中的分布和定位。
3、免疫共沉淀法：免疫共沉淀是一种用于检测蛋白质相互作用的方法，它通过特异性抗体与目标蛋白结合，并利用这个结合复合物来沉淀出与之相互作用的蛋白质被共沉淀的蛋白质可以进一步通过免疫印迹等方法进行检测，从而确定蛋白质之间的相互作用关系。
4、质谱分析法：质谱分析是一种高灵敏度和高分辨率的蛋白质检测方法。它通过将样品中的蛋白质分离、裂解并离子化，然后用质谱仪进行离子质量分析，根据质荷比可以确认蛋白质的身份和序列信息。质谱分析可以用于蛋白质组学研究、鉴定目标蛋白以及分析蛋白质修饰等。


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重组蛋白操作步骤：
科研重组蛋白的操作步骤主要包括亲和层析纯化、‌溶解冻干粉、‌以及使用SEC进行纯化。‌
亲和层析纯化
对于含有His标签的重组蛋白，‌可以使用镍离子附着的亲和吸附凝胶进行纯化。‌蛋白质会特异性地与吸附凝胶结合，‌然后通过不同浓度的咪唑洗脱缓冲液将目标蛋白洗脱下来。‌
对于含有GST融合标签的蛋白，‌可以使用Glutathione Sepharose 4B凝胶进行纯化。‌通过与还原型谷胱甘肽的作用，‌将目标蛋白从凝胶上洗脱下来。‌
溶解冻干粉
在使用冻干粉之前，‌需要先离心将冻干粉收集于管底。‌离心速度和时间根据使用的离心机而定，‌通常在10,000-12,000 rpm下离心30秒，‌或者在没有高速离心机的情况下，‌使用3000-3500 rpm离心5分钟。‌
离心后，‌将冻干粉复溶于适当的溶液中，‌如PBS或其他缓冲液，‌以溶解冻干粉。‌
使用SEC进行纯化
尺寸排阻色谱（‌SEC）‌是一种基于蛋白分子大小的纯化方法，‌其中蛋白分子不直接与流动相发生作用，‌因此缓冲液的成分不影响色谱柱的分辨率。‌大蛋白的保留时间较短，‌这有助于实现蛋白分离。‌
SEC的分辨率受多种因素影响，‌包括层析柱的床高度、‌流速、‌样本体积及蛋白分子量等。‌ ​​​​​​​