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上海经科化学科技有限公司
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5µg
pLenti-H2BC18-sgRNA (H2BC18基因敲除质粒)是一种在动物细胞中可以同时表达Cas9、目的基因的sgRNA和puromycin抗性基因的质粒。用于在动物细胞中直接基于CRISPR/Cas9技术敲除目的基因,或者通过包装慢病毒后基于CRISPR/Cas9技术敲除目的基因。本质粒中sgRNA的有效性已经通过T7EI法的验证。
本质粒在细菌中为Amp抗性,全长约13,000bp。本质粒的关键图谱信息请参考图1。本质粒可直接转染细胞用于目的基因的CRISPR/Cas9敲除,以及通过puromycin筛选稳定细胞株;也可以与pMDLg、Rev及VSV-g共转HEK293T细胞进行重组慢病毒(lentivirus)的包装,然后再用于感染细胞或组织并进行目的基因的CRISPR/Cas9敲除。

图1. 表达sgRNA、Cas9和puromycin抗性的pLenti-sgRNA质粒关键图谱信息。
本质粒中的sgRNA基于碧云天研发的CRISPR/Cas9 sgRNA快速筛选和验证体系获得,sgRNA的有效性已经通过T7EI法验证。
本质粒用于实验时,建议同时选购无任何靶向的对照质粒pLenti-Control-sgRNA (L00011)或靶向GFP的对照质粒pLenti-GFP-sgRNA (L00013)。
碧云天同时提供基于CRISPR/Cas9技术的H2BC18基因敲除的质粒(L05680 pLenti-H2BC18-sgRNA)、慢病毒(L05681 H2BC18 Knockout Lentivirus)、HEK293T细胞(L05682 H2BC18 Knockout HEK293T Cells)、HEK293T敲除细胞的RIPA裂解液(L05683 H2BC18 Knockout HEK293T RIPA Lysate)、HEK293T敲除细胞的Trizol裂解液(L05684 H2BC18 Knockout HEK293T Trizol Lysate)等产品,具体请在碧云天网站查询或在本产品网页点击相应产品。
H2BC18基因的基本信息如下:
| Species | Gene Symbol | Gene ID | GenBank Accession | Transcript |
| Human | H2BC18 | 440689 | BC110793 | NM_001024599 |
| About the gene | |
| Official Symbol | H2BC18 |
| Previous Symbol | - |
| Official Full Name | histone cluster 2 H2B family member f |
| Synonyms | HIST2H2BF |
| Location | 1q21.2 |
| Gene Type | protein_coding |
| Uniprot ID | Q5QNW6 |
| Pathway/Library | Epigenetic Regulators Related Genes Library |
| Gene Summary | Histones are basic nuclear proteins that are responsible for the nucleosome structure of the chromosomal fiber in eukaryotes. This structure consists of approximately 146 bp of DNA wrapped around a nucleosome, an octamer composed of pairs of each of the four core histones (H2A, H2B, H3, and H4). The chromatin fiber is further compacted through the interaction of a linker histone, H1, with the DNA between the nucleosomes to form higher order chromatin structures. This gene encodes a replication-dependent histone that is a member of the histone H2B family and is found in a histone cluster on chromosome 1. |
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文献和实验,例如细菌的质粒、噬菌体、病毒等,常用的载体一般为质粒;根据需要可直接从公司购买合适的载体,也可以自己构建。(3)连接:目的 DNA 片段和适当载体的连接, 一般采用核酸内切酶分别消化 DNA 片段和载体,使它们的末端能够连接到一起构成重组 DNA 分子。由于所用内切酶的切割特点不同,产生三种连接方式:粘端连接、平端连接和不相配的连接。(4)转化:将连接的重组 DNA 产物导入合适的宿主细胞,使其在宿主细胞内复制扩增或表达,赋予宿主细胞新的生物特征。(5)克隆化:重组 DNA 分子转化大肠杆菌后,在平板
PIPES 3.0G 10mM CaCl2.2H2O 2.2g 15mM KCl 18.6g 250mM add water up to 950ml 用 5N KOH 调PH至6.7-6.8*低PH不溶 在加终浓度未55mM的MnCl2.4H2O 10.9g 定溶到1升, 过滤灭菌, 4度保存. 但有人提出, 冻存后转化效率降低, 且这种方法不适合大质粒
进行标准化,预估扩增靶点的相对表达水平[1,2]。如今,终点 PCR 已基本被实时 PCR 或 qPCR 取代了,因为它们可获得更可靠和更准确的基因表达定量结果。 图 2:起始 cDNA 连续稀释液的 PCR 得率,通过在琼脂糖凝胶上对 PCR 产物染色进行可视化观察。 2.基因分型 PCR 可用于检测特定细胞或生物体中等位基因的序列差异。例如,基因敲除和敲入小鼠等转基因生物的基因分型[3]。引物对经设计位于目标区域侧翼,可根据是否存在扩增子及扩增子长度来检测遗传变异(图 3)。 图 3.PCR 用于
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