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1-3年
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999
- 供应商:
亦高生物
- CAS号:
63-91-2
- 规格:
P2126-1KG

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文献和实验,可以一次性地定量分析多种氨基酸对映体.所用衍生剂为邻苯二甲醛(OPA) 和N-乙酰-L-半胱氨酸(NAC) [2 ,3 ] . NAC是一种手性硫醇,其它手性硫醇如N-乙酰-D-青霉胺(NAP) 、N-异丁酰-L-半胱氨酸( IBLC) 、N-异丁酰-D-半胱氨酸(IBDC) [4 ] 也可与OPA 一起做为衍生剂. 1 实验部分 1. 1 试剂与仪器 DL-丝氨酸(上海丽珠东风生物技术有限公司) ;L-丝氨酸、β丙氨酸、DL-丙氨酸、L-丙氨酸、DL-苯丙 氨酸、L-苯丙氨酸
体外肝细胞损伤模型建立(CCl4和H2O2)1、大鼠肝细胞的分离和培养大鼠4%戊巴比妥麻醉,门静脉插管,先以无钙灌流液灌流,继以37℃通入O2的Ⅳ型胶原酶灌流液继续循环灌流15 min。将肝脏移至一平皿内,轻轻撕去肝包膜后,加入含5%小牛血清的清洗液,用吸管吹打成单个肝细胞悬液,200目尼龙网过滤,低速离心(500 r·min-1,1 min,4℃)弃上清,同法用清洗液反复洗3次。然后用完全1640培养液(内含10%小牛血清,105 U·L-1青霉素,100 mg·L-1链霉素和10 mg·
) 。 ( 4 ) 由于胰蛋白酶的独特性,使它成为在蛋白质胶内酶解之后用于 MS 鉴定的合适内切酶: a. 分子质量相对低的内切酶(约 24 kDa) ,用水化缓冲液溶解之后很容易渗透进入冷冻干燥的含蛋白质点的胶粒中。 b. 优良的酶切特性(酶切 K 和 R 的 C 端,如果下一个氨基酸是 P 则不进行酶切,如果 D/E 氨基酸的支链酸性端出现在旁边,则它的酶切效率降低,由于支链的空间效应,如果大量 F/W/Y 氨基酸出现在旁边,则它的酶切效率降低)。商业猪胰蛋白酶用 N-甲苯磺酰-L-苯基丙氨酸氯
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