Recombinant Human PKP2 protein

Recombinant Human PKP2 protein

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  • ¥1290 - 3960
  • 帛科
  • BK-DB7739
  • 国产
  • 2025年10月07日
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    • 英文名

      Recombinant Human PKP2 protein

    • 保质期

      12个月

    • 供应商

      上海帛科

    • 保存条件

      -20 to -80 °C

    • 规格

      50μg、100ug 、1mg

    商品介绍:
    货号 BK-DB7739 用途 仅供科研研究实验
    纯度 >90% as determined by SDS-PAGE 预测分子量 30.6 kDa
    表达宿主 E.coli 种属 Homo sapiens (Human)
    内毒素: Please contact with the lab for this information.
    蛋白构建: A DNA sequence encoding the human PKP2 (Asp571-Ala849) was fused with His tag
    制剂: Supplied as solution form  in  PBS pH 7.5 or lyophilized  from PBS pH 7.5.
    运输方式: In general, proteins are provided as lyophilized powder/frozen liquid. They are shipped out with dry ice/blue ice unless customers require otherwise.
    稳定性&储存: Use a manual defrost freezer and avoid repeated freeze thaw cycles.Store at 2 to 8 °C for one week .Store at -20 to -80 °C for twelve months from the date of receipt.
    复溶: Reconstitute in sterile water for a stock solution.A copy of datasheet will be provided with the products, please refer to it for details.
    分子别名: Plakophilin-2.
    背景介绍: May play a role in junctional plaques.
    Recombinant Human PKP2 protein
    表达载体在基因工程有以下几种元件:
    (1)选择标志的编码序列;
    (2)可控转录的启动子;
    (3)转录调控序列(转录终止子,核糖体结合位点);
    (4)一个多限制酶切位点接头;
    (5)宿主体内自主复制的序列。

    Recombinant Human PKP2 protein
    重组蛋白质的诱导表达:
    1. 挑取转化有质粒的单菌落, 接种于 3ml 选择性 LB 液体培养基中, 37 oC,250 rpm/min 振摇培养过夜。
    2. 次日将培养过夜的菌液 500 μl 再接种于 10ml(1:20)选择性 LB 液体培养基 中, 37 oC,250 rpm/min 振摇培养至光密度(OD600=0.6)时,取 1 ml 样本作 为诱导前标本, 10000g 离心 1min 收集菌体沉淀,-20 oC 冻存备用。
    3. 加入 1 mol/L IPTG 于菌液中,使 IPTG 终浓度为 1 mM ,37 oC ,250 rpm/min 振摇培养 4 ~ 5 小时。取 1 ml 样本作为诱导后标本,同上法收集菌体沉淀, -20 oC 冻存备用。
    4. 将诱导前后菌体沉淀用 20 ~ 40 μl PBS(pH= 8.0)重悬, 加入等体积的 2×SDS 上样缓冲液, 煮沸加热 5min,SDS 聚凝胶(SDS-PAGE)电泳分离 , 考马斯亮蓝染色 3 小时后,脱色观察结果。
    5. 选取诱导成功的细菌克隆,扩大诱导规模,收集菌体沉淀,于- 20 oC 保存,准备做下一步分析及纯化。
    公司出售的相关产品:

     
    Fas死亡结构域相关蛋白 磷酸化接头蛋白CrkL抗体
    FAM118A蛋白封闭多肽 Anti-nSMase/Gold
    FAM131C蛋白封闭多肽 Anti-EHF/Gold
    FHOD3蛋白封闭多肽 Anti-Bcl-2/Gold
    GLCNE蛋白封闭多肽 Anti-Activin receptor type-1/Gold
    锌指/环指蛋白4抗体 Anti-PIBF1/Gold
    1号染色体开放阅读框43抗体 Anti-BNP(H1G3)/Gold
    视黄酸激活基因8抗体 Anti-CC16/Gold
    趋化素样因子超家族成员1抗体 Anti-FLJ38767/Gold
    ATP6蛋白抗体 Anti-Nucleolar protein 3/Gold
    人前列腺特异性抗原单克隆抗体(包被) Anti-LCA5/Lebercilin/Gold
    磷酸化磷脂酰肌醇激酶催化亚单位A抗体 Anti-COX7C/Gold
    葡萄糖-6-磷酸酶3/G6Pase-β抗体 Recombinant Human PKP2 protein人血管内皮生长因子单克隆抗体
    KIAA1429蛋白抗体 干扰素α受体2抗体
    FAM46C蛋白封闭多肽 晶状体球蛋白γ3/γC-crystallin/白内障相关蛋白抗体
    重组蛋白质的可溶性鉴定:
    1. 将按上法诱导培养后收集的菌体重悬于裂解液 1 (Lysis buffer under native conditions )中,然后在-80 oC 低温冰箱中放置 10 min。
    2. 冰中解冻。
    3. 在冰浴上用超声破碎仪破菌 6 次, 每次 10 sec,间歇 10 sec,电压 200-300 V。
    4. 10000g,4oC,离心 20min,取上清(为溶液 A), - 20 oC 保存; 另将沉淀用 同样裂解液 1 溶解(为溶液 B),同样 -20 oC 保存,供后继分析使用。
    5. 将上述 A、B 溶液和诱导前后的细菌进行 SDS-PAGE 电泳, 考马斯亮蓝染色, 比较分析重组蛋白质的溶解性。如果诱导表达的蛋白质位于 A 溶液中, 则为可溶性蛋白;如果是在 B 溶液中,则为非可溶蛋白。

    Recombinant Human PKP2 protein
    重组蛋白质的分离纯化:
    1. 将菌体沉淀溶于适量裂解液 2(Lysis buffer under denaturing conditions )中,室温下搅拌和吹打沉淀,避免泡沫生成。
    2. 10000g ,4 oC,离心 30 min,收集上清液。
    3. 将 Ni-NTAAgarose 充填柱子,并连接于 Pharmarcia 低压液相层析系统,用 5 倍柱体积的裂解液 2 平衡 Ni-NTAAgarose,调节 A280 值至零线。
    4. 将适量上清液上样到 Ni-NTAAgarose 柱子中, 并用 lysis buffer 冲洗至 A280 值低于 0.01。
    5. 分别用 5 ~ 10 倍柱体积的清洗液 1 和清洗液 2(Washbuffer 1 and 2)清洗柱 子,直至 A280 值低于 0.01。
    6. 用洗脱液(Elution buffer)洗脱重组蛋白质, 在 A280 值监测下,收集出现峰 线后含有重组蛋白的所有洗脱液。

     

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