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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存:
49
- 英文名:
MI-773
- CAS号:
1303607-07-9
- 供应商:
上海莼试
- 保存条件:
Store at -20°C
- 规格:
10 mM * 1 mL in DMSO 5mg 10mg 50mg 100mg
| 产品名称 | MI-773 | 产品货号 | CS-01Y64388 |
| 规格 | 10 mM * 1 mL in DMSO 5mg 10mg 50mg 100mg | CAS号 | 1303607-07-9 |
| 含量 | >98.00% | 分子式 | C29H34Cl2FN3O3 |
| 分子量 | 562.5 | 用途 | 仅供科研研究使用 |
MI-773规格:10 mM * 1 mL in DMSO 5mg 10mg 50mg 100mg
CAS:1303607-07-9
别名:N/A
化学名:(2'R,3S,4'S,5'R,Z)-6-chloro-4'-(3-chloro-2-fluorophenyl)-2-hydroxy-N-((1r,4R)-4-hydroxycyclohexyl)-2'-neopentylspiro[indole-3,3'-pyrrolidine]-5'-carbimidic acid
分子式:C29H34Cl2FN3O3
分子量:562.5
溶解度:Soluble in DMSO
储存条件:Store at -20°C
General tips:For obtaining a higher solubility , please warm the tube at 37 ℃ and shake it in the ultrasonic bath for a while.
Shipping Condition: Evaluation sample solution : ship with blue ice All other available size: ship with RT , or blue ice upon request
产品描述:
MI-773 is a small molecule inhibitor of MDM2 with IC50 value of 62nM [1].MI-773 is a small molecule MDM2 antagonist. It is a spirooxindole derivative. MI-773 shows a high MDM2 affinity with IC50 value of 62nM in the FP competitive binding experiment. In the in vitro cell-based assay, MI-773 shows a similar inhibition efficacy with its enantiomer MI-77301. The GI50 values are 58nM and 33nM for MI-773 and MI-77301, respectively. Both MI-773 and MI-77301 exert considerable activity at dose of 100 mg/kg in mouse xenograft models of osteosarcoma, prostate cancer, colorectal cancer, leukemia or melanoma. Currently, an international and multicenter phase I trial of MI-773 is underway for patients with liposarcomas and other p53-wild-type tumors [1, 2].References:[1] Zak K, Pecak A, Rys B, Wladyka B, D?mling A, Weber L, Holak TA, Dubin G. Mdm2 and MdmX inhibitors for the treatment of cancer: a patent review (2011-present). Expert Opin Ther Pat. 2013 Apr;23(4):425-48.[2] Shoushtari AN, Van Tine BA, Schwartz GK. Novel treatment targets in sarcoma: more than just the GIST. Am Soc Clin Oncol Educ Book. 2014:e488-95.
使用方法:
1. 常用筛选浓度
注意:用来筛选稳转株的工作浓度需要根据细胞类型,培养基,生长条件和细胞代谢率而变化,推荐使用浓度为50-1000μg/mL。对于第一次使用的实验体系建议通过建立杀灭曲线(kill curve),即剂量反应性曲线,来确定最佳筛选浓度。
一般而言,哺乳动物细胞50-500μg/mL;细菌/植物细胞20-200μg/mL;真菌300-1000μg/mL。
2. 杀灭曲线的建立
注意:为了筛选得到稳定表达目的蛋白的细胞株,需要确定能够杀死未转染宿主细胞的抗生素浓度,可通过建立杀灭曲线(剂量反应曲线)来实现,至少选择5个浓度。
1) 第一天:未转化的细胞按照20-25%的细胞密度铺在合适的培养板上,37℃,CO2培养过夜;注:对于需要更高密度来检测活力的细胞,可增加接种量。
2) 根据细胞类型,设定合适范围内的浓度梯度。以哺乳动物细胞为例,可设定50,100,250,500,750,1000μg/mL。先用去离子水或者PBS buffer按照1:10的比例将母液稀释到5 mg/ml,然后按照下表稀释到相应浓度的工作液。
3) 第二天:替换旧的培养基,换用新鲜配制的含有相应浓度药物的培养基。每个浓度做三个平行孔。
4) 接下来每3-4天更换新的含药物培养基。
5) 按照固定的周期(如每2天)进行活细胞计数来确定阻止未转染细胞生长的恰当浓度。选择在理想的天数(通常是7-10天)内能够杀死绝大多数细胞的浓度为稳定转染细胞筛选用的工作浓度。
3. 稳定转染细胞的筛选
1) 转染48h后,用含有适当浓度的潮霉素B筛选培养基来传代细胞(直接传代或者稀释后传代)。
注意:细胞处于活跃分裂状态时抗生素的杀伤。则当细胞过于稠密,其效率会降低。为了得到较好的筛选效果,最好将细胞稀释至丰度不超过25%
2) 每隔3-4天更换含有药物的筛选培养液。
3) 筛选7天后观察并评估细胞克隆(集落)的形成情况。集落的形成可能还需要一周或者更多的时间,这取决于宿主细胞类型,转染,以及筛选效果。
4) 挑取并转移5-10个抗性克隆于35mm细胞培养板,继续用含药物的筛选培养液维持培养7天。
5) 之后更换正常培养基培养即可。
公司正在出售的产品:
| (D-His¹)-Exenatide | Alarin (rat) |
| ALB-127158(a) | 胸腺嘧啶核苷磷酸化酶(TP)ELISA试剂盒 |
| Albendazole | 胸腺基质淋巴细胞生成素(TSLP)ELISA试剂盒 |
| Albendazole D3 | 胸腺白血病抗原(TLa)ELISA试剂盒 |
| Albendazole Oxide | 胸腺非依赖性抗原(TI-Ag)ELISA试剂盒 |
| Albendazole sulfoxide D3 | 性激素结合球蛋白(SHBG)ELISA试剂盒 |
| Albendazole-d7 | 性别决定区Y蛋白(SRY)ELISA试剂盒 |
| Albofungin | 信号识别颗粒抗(SRP)ELISA试剂盒 |
| Alcaftadine | 胸腺肽(Thymosin)ELISA试剂盒 |
| Alclofenac | 胸腺肽α1(Thymosin α1)ELISA试剂盒 |
| Alclometasone Dipropionate | 胸腺肽β4(Thymosin β4)ELISA试剂盒 |
| Alda 1 | 胸腺五肽(TP-5)ELISA试剂盒 |
| Aldehyde Reactive Probe (trifluoroacetate salt) | MI-773胸腺依赖性抗原(TD-Ag)ELISA试剂盒 |
| Adefovir | 雄激素结合蛋白(ABP)ELISA试剂盒 |
| 人RAR相关孤儿素受γELISA试剂盒 | 雄激素受(AR)ELISA试剂盒 |
蛋白酶抑制剂混合物实验步骤:
(1)实验开始前将RNA提取液于65℃水浴锅中预热,离心管中加入ME(巯基乙醇),(10mL加80ul,50mL中加入300ul)
(2)取约0.8g菌丝体(液体培养获得的菌丝用真空抽滤即可!固体培养就更好说了),在液氮中迅速磨成精细粉末,装入50mL离心管,按1g材料8mL的量加入预热的RNA提取液,颠倒混匀
(3)65℃水浴3-10 min,期间混匀2-3次
(4)加入等体积的酚(注意是酸酚pH4.5)::yi戊醇(25:24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(5)取上清,等体积的yi戊醇(24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(6)加入1/4V体积10M LiCl溶液,4℃放置6h以上(或过夜)
(7)10,000rpm,4℃离心20min
(8)弃上清,用500ul SSTE溶解沉淀
(9)酚::yi戊醇(25:24:1)抽提两次,:yi戊醇(24:1)抽提1次(10,000rpm,4℃,5min)
(10)加2V体积的无水乙醇,在-70℃冰箱沉淀30min以上
(11)12,000rpm,4℃离心20 min
(12)弃上清.沉淀用70%酒精漂洗一次,干燥
(13)加200ul的DEPC处理水溶解
(14)用非变性琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计扫描检测RNA的质量(在抽提过程中,若蛋白质含量或其它的杂质还较多,可以增加抽提次数)
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【求助】谁有用SYBR Green法做mi-RNA得实验流程及相关步骤原理,谢谢共享
如来的观音 如题,谢谢 zjubell 建议先google一下,至少有些基础的认识。 原理其实很简单的,用一个带loop的引物去做逆转(单链也行,但带loop的效率会高一些) 然后正向引物是特异性引物,反向引物其实是一条通用引物,与loop结合的。 再用普通的sybr green直接定量PCR即可。 一个样本,一个miRNA几百元其实比较贵了。 提RNA,逆转,引物,我觉的50块钱么差不多
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