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- CORNING/康宁
- 美国
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- 2025年07月05日
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- 文献和实验
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文献和实验SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法测定蛋白质的分子量（垂直板型电泳）（图）
。 Ferguson公式：1gmR=1gm0-KRC 该公式原来是Ferguson提出来描述蛋白质在淀粉凝胶中电泳行为的，后来证明它也同样适用于聚丙烯酰胺凝胶电泳，式中mR是蛋白质在一定浓度凝胶（C）中的迁移率；m0是当凝胶浓度外推到零时的迁移率即自由迁移率，它与蛋白质的净电荷量（q）成正比，与蛋白质在溶液中的摩擦系数（f）成反比（m0∝q/f，f由溶液的粘滞性、蛋白质分子的大小和形状决定）；KR是阻滞系数（retardation coefficient），它与蛋白质分子量成线性关系。因此，不同的蛋白质分子
到 Ficoll 中。 然后将稀释的血液缓慢加入覆盖在 Ficoll 上面。将细胞在 1500 RPM 下离心 30 分钟。吸出上清液，将样品合并， 并用 PBS + 5％ FCS 洗涤。将细胞沉淀重新悬浮，使用 ViCell 计数，然后稀释至每管的终浓度为 1 x 106 细胞/100 µL，用于染色。DuraClone 染色步骤将 100 万个 PBMC 加入 DuraClone IM TCR 管中，然后涡旋 5 秒。在室温下在避光孵育 20 分钟后，用 3 mL PBS 洗涤 PBMC，然后在 400
】1. 消化缓冲液：100 mM NaCl，10 mM Tris.Cl (pH8.0) 25 mM EDTA (pH8.0)，0.5% (w/v) SDS，0.1 mg/mL 蛋白酶 K。2. 7.5mol/L 乙酸铵。3. 100% 乙醇。4. 酚/氯仿/异戊醇。【实验方法与步骤】1. 将新鲜组织剪成小块并立即置于液氮中冻存；2. 将 200 mg～1 g 的组织用预冷的研钵研碎，或用锤子将其捣为细粉末，每 100 mg 组织用 1.2 mL 消化缓冲液悬浮，然后于 50℃ 摇荡温育 12~18 h
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