赛默飞世尔Thermo Fisher SILVER DDTC

非同位素银染测序系统操作技术

用电泳槽，制胶设备，PCR仪。 　　四、试剂 　　（1）SILVER SEQUENCETM DNA测序试剂盒。 　　（2）丙烯酰胺和甲叉双丙烯酰胺储备液（38%丙烯酰胺 W/V，2%甲叉双丙烯酰胺 W/V)：95g丙烯酰胺，5g甲叉双丙烯酰胺溶于140ml 双蒸水中，定容至250ml，0.45mm过滤器过滤后，贮于棕色瓶中，置于4℃冰箱可保存2周。 　　（3）10%过硫酸铵，0.5g过硫酸铵溶于4ml水中，定容至5ml，应新配新用。 　　（4）10×TBE缓冲

Standard PCR Protocol

agarose gel made up in TBE, preferably containing 50ng/ml ethidium bromide.  Run at 80 -120 volts (not too slow or small products diffuse; not too fast or bands smear) until BPB reaches end of gel (large products) or 2/3 down gel (small products). Use

测序（sequencing）技术

物包括质粒小量制备来说，并不能给出一个可信的DNA 浓度估计，混杂的染色体DNA 、蛋白、RNA、有机物及无机化合物均可能有260 nm光吸收。因此，分光光度法常常错误地高估DNA 浓度。 　　 　　（3） DNA 制备过程中用核糖核酸酶处理所产生核糖核苷酸，虽然它们在电泳后DNA 样品的前面，并不能观察到，但它们仍会有260nm光吸收。 　　（一）测序反应： 　　　 　　1. 对于每组测序反应，标记四个0.5ml eppendorf管(G、A、T、C)。每管加入2ml