Amifostine thiol

化学性质:   

 
规格：10 mg
CAS：31098-42-7
别名：N/A
化学名：N/A
Amifostine thiol分子式：C5H14N2S

分子量：134.24
溶解度：H2O: 250 mg/mL (1862.34 mM); DMSO: < 1 mg/mL (insoluble   or slightly soluble)
储存条件：4°C, protect from light, stored under nitrogen
General tips：For obtaining a higher solubility , please warm the tube at 37 ℃ and shake it in the   ultrasonic bath for a while.
Shipping Condition: Evaluation sample solution : ship with blue ice All other available size: ship with RT , or   blue ice upon request
本产品仅供科学实验研究使用! 不能用于临床或动物诊断！

产品名称	Amifostine thiol	产品货号	CS-01Y65251
规格	10 mg	CAS号	31098-42-7
含量	>95.00%	分子式	C5H14N2S
分子量	134.24	用途	仅供科研研究使用

产品描述: 

 
Amifostine thiol (WR-1065) is an active metabolite of the cytoprotector Amifostine . Amifostine thiol is a cytoprotective agent with radioprotective abilities. Amifostine thiol activates p53 through a JNK-dependent signaling pathway[1][2][3].Amifostine thiol can reduce both the direct and delayed detrimental effects of both high and low-LET radiation exposures[1].Amifostine thiol attenuates both the DNA damage and the G1-phase arrest induced by radiation[1].Amifostine thiol (4 mM; 30 minutes) protects RKO36 cells from chromosomal damage and death induced by ionizing radiation[1].Amifostine thiol (4 mM; 30 minutes) protects irradiated RKO36 cells from delayed genomic instability[1].Amifostine thiol is cytotoxic to RKO36 cells at milimolar concentrations, especially after continuous treatment[1].Amifostine thiol at 40 μM protects RKO36 cells from delayed genomic instability but not from cell death and immediate chromosomal damage[1].Amifostine thiol activates JNK resulting in the phosphorylation of p53 at threonine 81[2].Amifostine thiol affects phosphorylation of topoisomerase IIα leading to changes in enzyme activity and cell cycle progression in CHO AA8 cells[3].[1]. Jaroslaw Dziegielewski, et al. WR-1065, the Active Metabolite of Amifostine, Mitigates Radiation-Induced Delayed Genomic Instability. Free Radic Biol Med. 2008 Dec 15; 45(12): 1674-1681. [2]. Olivier Pluquet, et al. The cytoprotective aminothiol WR1065 activates p53 through a non-genotoxic signaling pathway involving c-Jun N-terminal kinase. J Biol Chem. 2003 Apr 4;278(14):11879-87. J Biol Chem. 2003 Apr 4;278(14):11879-87. [3]. J. S. Murley, et al. WR-1065, an active metabolite of the cytoprotector amifostine, affects phosphorylation of topoisomerase IIα leading to changes in enzyme activity and cell cycle progression in CHO AA8 cells. Cell Prolif. 1997 Jun; 30(6): 283-294.
使用方法: 

 
1. 常用筛选浓度
　　注意：用来筛选稳转株的工作浓度需要根据细胞类型，培养基，生长条件和细胞代谢率而变化，推荐使用浓度为50-1000μg/mL。对于第一次使用的实验体系建议通过建立杀灭曲线(kill curve)，即剂量反应性曲线，来确定最佳筛选浓度。
　　一般而言，哺乳动物细胞50-500μg/mL;细菌/植物细胞20-200μg/mL;真菌300-1000μg/mL。
2. 杀灭曲线的建立
　　注意：为了筛选得到稳定表达目的蛋白的细胞株，需要确定能够杀死未转染宿主细胞的抗生素浓度，可通过建立杀灭曲线(剂量反应曲线)来实现，至少选择5个浓度。
1) 第一天：未转化的细胞按照20-25%的细胞密度铺在合适的培养板上，37℃，CO2培养过夜;注：对于需要更高密度来检测活力的细胞，可增加接种量。
2) 根据细胞类型，设定合适范围内的浓度梯度。以哺乳动物细胞为例，可设定50，100，250，500，750，1000μg/mL。先用去离子水或者PBS buffer按照1:10的比例将母液稀释到5 mg/ml，然后按照下表稀释到相应浓度的工作液。
3) 第二天：替换旧的培养基，换用新鲜配制的含有相应浓度药物的培养基。每个浓度做三个平行孔。
4) 接下来每3-4天更换新的含药物培养基。
5) 按照固定的周期(如每2天)进行活细胞计数来确定阻止未转染细胞生长的恰当浓度。选择在理想的天数(通常是7-10天)内能够杀死绝大多数细胞的浓度为稳定转染细胞筛选用的工作浓度。
3. 稳定转染细胞的筛选
1) 转染48h后，用含有适当浓度的潮霉素B筛选培养基来传代细胞(直接传代或者稀释后传代)。
　　注意：细胞处于活跃分裂状态时抗生素的杀伤。则当细胞过于稠密，其效率会降低。为了得到较好的筛选效果，最好将细胞稀释至丰度不超过25%
2) 每隔3-4天更换含有药物的筛选培养液。
3) 筛选7天后观察并评估细胞克隆(集落)的形成情况。集落的形成可能还需要一周或者更多的时间，这取决于宿主细胞类型，转染，以及筛选效果。
4) 挑取并转移5-10个抗性克隆于35mm细胞培养板，继续用含药物的筛选培养液维持培养7天。
5) 之后更换正常培养基培养即可。
蛋白酶抑制剂混合物实验步骤: 

 
(1)实验开始前将RNA提取液于65℃水浴锅中预热,离心管中加入ME(巯基乙醇),(10mL加80ul,50mL中加入300ul)
(2)取约0.8g菌丝体(液体培养获得的菌丝用真空抽滤即可！固体培养就更好说了),在液氮中迅速磨成精细粉末,装入50mL离心管,按1g材料8mL的量加入预热的RNA提取液,颠倒混匀
(3)65℃水浴3-10 min,期间混匀2-3次
(4)加入等体积的酚(注意是酸酚pH4.5)::yi戊醇(25:24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(5)取上清,等体积的yi戊醇(24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(6)加入1/4V体积10M LiCl溶液,4℃放置6h以上(或过夜)
(7)10,000rpm,4℃离心20min
(8)弃上清,用500ul SSTE溶解沉淀
(9)酚::yi戊醇(25:24:1)抽提两次,:yi戊醇(24:1)抽提1次(10,000rpm,4℃,5min)
(10)加2V体积的无水乙醇,在-70℃冰箱沉淀30min以上
(11)12,000rpm,4℃离心20 min
(12)弃上清.沉淀用70%酒精漂洗一次,干燥
(13)加200ul的DEPC处理水溶解
(14)用非变性琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计扫描检测RNA的质量(在抽提过程中,若蛋白质含量或其它的杂质还较多,可以增加抽提次数)
公司正在出售的产品: 

 

Z-Asp(OtBu)-OH.H2O	Vortioxetine (Lu AA21004) HBr
bPiDDB	亚甲基四氢叶酸脱氢酶1检测试剂盒 MTHFD1 ELISA Kit
Sumatriptan	亚甲基四氢叶酸还原酶检测试剂盒 MTHFR ELISA Kit
β-Amyloid 12-20	牙本质涎磷蛋白检测试剂盒 DSPP ELISA Kit
Betamethasone 21-phosphate (sodium salt hydrate)	牙骨质蛋白1检测试剂盒 CEMP1 ELISA Kit
RS 127445 hydrochloride	血型糖蛋白E检测试剂盒 GYPE ELISA Kit
(±)7-HDHA	血型糖蛋白C检测试剂盒 GYPC ELISA Kit
Lanabecestat	血型糖蛋白B检测试剂盒 GYPB ELISA Kit
L-745870	亚甲基四氢叶酸脱氢酶2检测试剂盒 MTHFD2 ELISA Kit
CGP 25454A	亚精胺合酶检测试剂盒 SRM ELISA Kit
L-3-n-Butylphthalide	型胆碱受α2检测试剂盒 CHRNα2 ELISA Kit
Emraclidine	型胆碱受α3检测试剂盒 CHRNα3 ELISA Kit
Amisulpride hydrochloride	Amifostine thiol型胆碱受α4检测试剂盒 CHRNα4 ELISA Kit
Tenofovir alafenamide hemifumarate	型胆碱受α5检测试剂盒 CHRNα5 ELISA Kit
人抗乙型肝炎表面抗ELISA试剂盒	型胆碱受α7检测试剂盒 CHRNα7 ELISA Kit