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文献和实验瞬时表达效果可采用磷酸钙沉淀法、电击法、脂质体法等;若目的要获取永久性稳定表达应选用逆转录病毒等病毒载体导入法。下面介绍几种常用基因转染方法。 二、物理化学法基因转染技术(一)磷酸钙-DNA共沉淀法核酸以磷酸钙-DNA共沉淀物的形式出现时,可使DNA附在细胞表面,利于细胞吞入摄取,或通过细胞膜脂相收缩时裂开的空隙进入细胞内,进入细胞的DNA仅有1%~5%可以进入细胞核中,其中仅有不到1%的DNA可以与细胞DNA整合,在细胞中进行稳定表达,基因转导的频率大约为10-4,这项技术能用于任何DNA导入
表面的透明软骨,以磷酸缓冲液(PBS含青霉素、链霉素各100U/L)冲洗2遍,将软骨剪切成1-3mm3 左右碎块,0.25%胰蛋白酶先消化30-35分钟,PBS浸洗2遍;后置于50ml玻璃培养瓶,加0.1%Ⅱ型胶原酶(DMEM配制),37消化3.5-4.5小时,每小时置37℃恒温振荡箱振荡5min。直到软骨块大部分呈肉眼可见的絮状物,倒置显微镜下观察,软骨细胞大部分分离后,以弯头吸管轻轻吹打,细胞悬液以1200r/min离心7分钟,弃上清,以含10%新生牛血清DMEM的培养液终止消化,离心弃上清
? 一般使用之trypsin-EDTA 浓度为0.05% trypsin-0.53mMEDTA.4 Na。第一次开瓶后应立即少量分装于无菌试管中, 保存于-20 °C,避免反复冷冻解冻造成trypsin 之活性降低, 并可减少污染之机会。 46、欲将一般动物细胞离心下来,其离心速率应为多少转速? 欲回收动物细胞, 其离心速率一般为300x g (约1,000 rpm),5 - 10 分钟, 过高之转速, 将造成细胞死亡。 47、细胞
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