免疫组化通用试剂盒（生物素/链亲合素-HRP系统，针对小鼠来

组化染色背景高？没信号？一篇文章带你快速掌握免疫组化！

位。 IF（免疫荧光检测）是采用荧光素标记物作为探针，形成的抗原抗体复合物上带有荧光素，在荧光显微镜下，受激发光的照射后发出一定波长的荧光，从而对细胞、组织中的抗原进行定位或定量。 表 1 IHC/ICC与IF特点对比 IHC/ICC 与 IF 染色中使用的抗体主要为一抗与二抗，根据是否选用二抗以及二抗标记物类型可形成多种不同的检测系统。信号放大是免疫组化实验中的重要步骤，信号放大可以使目标蛋白质的信号从微弱到明显，从而更容易被观察和定量。现有的信号放大技术多为链霉亲和素-生物素法，该方法基于链酶亲和

抗体选择指南

，则不应选择小鼠或大鼠源的一抗，最好选兔源的一抗，则二抗则可选择偶联了检测分子（酶、荧光素、生物素等）的抗兔IgG。 如果选择有偶联物的一抗则不适用上述情况，除免疫组化外的其它对不含内源性免疫球蛋白样本的检测方法，则抗体宿主物种的影响不大，如对不含IgG 的细胞裂解物样本的western blotting检测，尽管如此，含有血清的组织裂解物和组织培养上清中含有免疫球蛋白，还原变性样本中含IgG，在western blot 检测中则结合出现IgG 分子50 and 25 kDa 的重链和轻链

免疫组化经验总结

保护抗原和固定组织作用，过氧化氢孵育时间过长易引起脱片；现用现配，配好后4 ℃避光保存。不过，现在已有"第二代即用型免疫组化试剂盒"避免内源性生物素的干扰，推荐使用。   7）血清封闭 组织切片上有剩余的位点可以与一抗非特异性结合，造成后续结果的假阳性；封闭血清一般是和二抗同一来源的，血清中动物自身的抗体，预先能和组织中有交叉反应的位点发生结合；也可以用小牛血清、BSA、羊血清等，但不能与一抗来源一致。一般室温 10-30 min。但也要防止封闭过度 8）一抗和二