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- Thermo Fisher
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北京泽平
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1年
- 规格：
EA
货号：T_70310275091
中文名称：
英文名称：PCR-COOLER 0,2ML PINK
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文献和实验做的是外参。外参可以最大限度地降低对限定造成实验的作用，适用于内参表达不稳定的外泌体或暂时未发现合适内参的其他样品，对目的microRNA进行相对定量，替代内参作用。部分文献或许可以类似于U6等作为内参。 16 、下游qPCR检测时C T值过高如何处理？ 答：外泌体RNA是微量的，首先样品准备阶段保证样品的质量和数量充足（例如血清建议新鲜样本准备2ml以上）。有实验表明，2ml血清样本提取的外泌体，qPCR检测U6（细胞样本microRNA内参存在）的CT值只有30+，基因CT值在30
，约1-2min。 3.【重悬】75%酒精擦拭冻存管外壁，安全柜内开盖，将细胞悬液沿管壁缓慢滴入含9mL预热完全培养基的离心管中，轻柔混匀。 4.【离心】300×g离心5min，弃上清，减少DMSO残留。 5.【重悬】加入1-2mL完全培养基轻轻吹打重悬；接种T25培养瓶（4-6mL培养基），十字混匀，标注名称、代次、日期。 6.【培养】放入37℃、5%CO2培养箱；24-48h贴壁后换液去除死细胞碎片。 二、细胞传代 1.【实验准备】配制完全培养基：MEM改良Eagle培养基（abs9467
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