LLC [LL/2; LLC1] (小鼠肺癌细胞) (STR

基于钙调素与荧光蛋白融合的钙指示剂

，因为，CFP 和 YFP 只有几个点突变的差别。需从琼脂糖胶上纯化大小正确的 DNA 片段。 6. 如果你的实验中钙变色子降解或在细菌细胞中不溶，可以用哺乳细胞降解物完成鉴定。为收获产物，细胞应生长在直径为 10 cm 的培养皿中。转染 24 h 后，把细胞刮出培养皿并在低渗的破解缓冲液（50 mmol/L HEPES，pH 7.4 和 100 mmol/L 氯化钾；5 mmol/L 氯化镁和 0.5% Triton X-100 ) 中破碎。然后离心混合物以去除碎片。下一步，在 2 L 缓冲液（50

转基因小鼠模型的建立(SOP)

注射的转入基因通常为去除载体序列的线状DNA，转基因所用载体是真核表达载体，即含有在哺乳动物细胞内表达的真核启动子。所谓组织特异性的实现多是通过组织特异性启动子来实现组织特异性表达的。制备转基因小鼠，必须对待导入DNA进行分离纯化。实验必须用经过琼脂糖电泳鉴定并确定其纯度的DNA，对导入基因的大小没有特别的限制，长链DNA也可成功。 实验中注意防止一些杂质堵塞注射针，如琼脂糖颗粒、纤维物质等，需尽量超速离心除去。DNA的注射质量是实验成功的关键。研究表明DNA注射的起始浓度大约在1ng/ml，当DNA

【转帖】western blot常见问题汇编

。ＥＤＴＡ用于灭活金属蛋白酶（主要是其鏊合作用）。加过多的蛋白酶抑制剂可以导致蛋白质的修饰，做ＷＢ无所谓，做ＭＡＩＬＤＩ时会给正确鉴定带来麻烦。裂解缓冲液中少了两性电解质(在2-D裂解缓冲液中，两性电解质起的作用：提供连续的PH梯度，从很大程度上增加蛋白质的溶解性;还可以去除一部分核酸)；也不推荐采用SDS，因SDS会与蛋白质结合导致其等电点发生改变，如果您实在要用，终浓度降到0.1%以下。9. 条件的摸索DDD. 用的是Santa Cruz的抗体，也实验过一抗和二抗肯定能结合，二抗加DAB肯定能显色