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抗坏血酸过氧化物酶(APX)试剂盒

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  • ￥620
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  • WS3020F
  • 国内
  • 2025年07月13日
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    • 英文名：

      Ascorbate Peroxidase (APX) Kit

    • CAS号：

      WS3020F

    • 保质期：

      六个月

    • 供应商：

      上海瓦兰生物

    • 保存条件：

      2-6℃

    • 规格：

      48T

    本试剂盒仅供科研使用
    抗坏血酸过氧化物酶（Ascorbate peroxidase,APX）试剂盒说明书
    （货号：WS3020F 紫外法 48 样）
    一、产品简介：
    抗坏血酸过氧化物酶（APX；EC 1.11.1.11)也称维生素 C 过氧化物酶，是植物细胞中防御外界氧化胁
    迫和植物本身活性氧代谢的重要抗氧化酶类，在降低 H2O2 对植物细胞产生氧化损伤方面起关键作用。
    抗坏血酸过氧化物酶（APX）首先与 H2O2形成中间复合物，中间复合物接着氧化 AsA，因此 APX 与
    AsA 具有一定的负相关性，通过测定 AsA 氧化速率，来计算 APX 酶活性。
    二、测试盒组成和配制：
    试剂名称
    规格
    保存要求
    备注
    提取液
    液体 60mL×1 瓶
    4℃保存
    试剂一
    液体 40mL×1 瓶
    4℃保存
    试剂二
    粉剂 mg×1 瓶
    4℃保存
    用前甩几下或 4℃离心使试剂
    落入试管底部，再加 6 mL 蒸
    馏水充分溶解，用不完的试剂
    分装后-20℃保存(可保存一个
    月)，禁止反复冻融，解冻后
    可 4℃保存并一周内使用完。
    试剂三
    液体 6mL×1 瓶
    4℃保存
    三、所需仪器和用品：
    紫外分光光度计、1mL 石英比色皿（光径 1cm）、低温离心机、移液枪、研钵、冰和
    蒸馏水。
    四、抗坏血酸过氧化物酶（APX）活性测定：
    建议正式实验前选取 2 个样本做预测定，了解本批样品情况，熟悉实验流程，避免实验
    样本和试剂浪费！
    1、样本制备：
    取约 0.1g 组织（水分充足的样本可取 0.5g），加入 1mL 提取液，进行冰浴匀浆。12000rpm，
    4℃离心 20min，取上清置冰上待测。
    【注】：若增加样本量，可按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为 1：5~10 的比例进行提取
    2、上机检测：
    ① 紫外分光光度计预热 30 min，调节波长到 290nm，用蒸馏水调零。
    ② 试剂一放 25℃水浴中预热 30min（如果实验室温度达到 25℃以上，可以静置 30min）
    ③ 依次在 1mL 石英比色皿中加入：
    试剂名称（μL）
    测定管
    样本
    60
    试剂一
    740
    试剂二
    100
    试剂三
    100
    迅速混匀，在 290nm 测定 30 s 和 5min30 s 分别
    读值 A，相应记为 A1 和 A2，△A=A1-A2。
    【注】1.若△A 的值在零附近，可适当延长反应时间到 10min30s 读取 A2，改变后的反应时间需代
    入计算公式重新计算。或适当加大样本量，则改变后的加样体积需代入计算公式重新计算。
    2. 若起始值 A 太大如超过 2（如颜色较深的植物叶片，一般色素较高，则起始值相对会偏高），
    可以适当减少样本加样量，则改变后的加样体积需代入计算公式重新计算。本试剂盒仅供科研使用
    2
    3. 若下降趋势不稳定，可以每隔 10S 读取一次吸光值，选取一段线性下降的时间段来参与计
    算，相对应的 A 值也代入计算公式重新计算。
    五、结果计算：
    1、按蛋白浓度计算：
    酶活定义：25℃条件下，每毫克蛋白每分钟氧化 1μmol AsA 为 1 个酶活单位。
    APX(μmol/min/mg prot)=△A÷(ε×d)×V2×106÷(Cpr×V1)÷T=1.19×△A÷ Cpr
    2、按质量计算：
    酶活定义：25℃条件下，每克组织每分钟氧化 1μmol AsA 为 1 个酶活单位。
    APX(μmol/min/g 鲜重)=△A÷(ε×d)×V2×106÷(W×V1÷V)÷T=1.19×△A ÷W
    ε---AsA 在 290nm 处摩尔吸光系数为 2.8×103 L/mol/cm；
    d---比色皿光径（cm），1 cm；
    106---1mol=1×106μmol；
    W---样本质量，g；
    V---加入提取液体积，1mL；
    V1---加入反应体系中上清液体积（mL），60μL=0.06mL；
    V2---反应体系总体积（L），1000μL=1×10-3 L；
    T---催化反应时间（min），5min，
    Cpr---上清液蛋白质浓度（mg/mL），建议使用本公司 BCA 蛋白质含量测定试剂盒。

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