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现货
- 供应商:
上海经科化学科技有限公司
- 规格:
100mL
胰蛋白酶(Trypsin)是一种丝氨酸水解酶,它能把多肽链中赖氨酸和精氨酸残基中的羧基侧切段,水解细胞间的蛋白质,破坏细胞间的连接,从而使组织或贴壁细胞离散成单个细胞。胰酶分散细胞的活性与组织或细胞的特性、胰酶浓度、温度和作用时间有关,在PH 8.0和37℃时,胰酶的作用能力最强,因此使用胰酶时,应把握好浓度、温度和时间,以免消化过度造成细胞损伤。
一般常用胰酶的工作浓度为0.25%,而半贴壁细胞或对胰酶敏感的细胞常采用低浓度(0.05%)的胰酶进行细胞消化。由于EDTA能够螯合Ca2+和Mg2+,从而破坏细胞连接促进细胞的解离,因此在胰酶溶液中常常会加入一定量的EDTA混合使用,以增强解离效果。
产品信息
| 形态 |
液体 |
| 规格 |
100mL |
| PH |
7.2-7.4 |
| 溶剂 |
D-Hank's |
| 胰酶蛋白酶浓度 |
2.5g/L |
| EDTA•2Na |
0.2g/L |
| 酚红指示剂 |
无 |
| 储存条件 |
-5~-20℃ |
| 运输条件 |
冷冻 |
| 有效期 |
12个月 |
注意事项
1、由于不同的组织或者细胞对胰酶的作用反应不一样,因此操作人员应根据实际情况,确定最佳消化时间;消化细胞时间不宜过长,否则会影响细胞贴壁和生长状况;
2、使用本产品时应注意无菌操作,避免污染;
3、不宜长时间放置于室温环境或2~8℃长期保存;
4、2~8℃中解冻,摇匀后使用,切忌反复冻融,用量较少时建议分装冻存。
5、由于D-Hank's平衡盐溶液NaHCO3含量较低(0.35g/L),因此该型胰蛋白酶溶液不能用于5% CO2的环境,若放入CO2培养相,溶液将迅速变酸,使用时应注意;
6、本产品仅用于科研或进一步研究使用,不用于诊断和治疗。
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文献和实验。4、从温箱中取出培养瓶,向瓶底轻轻注入含20%CS及PS的DMEM培养液5ml,然后缓缓翻转培养瓶,让培养液慢慢覆盖附于瓶壁上的组织小块,置于37℃温箱内培养。5、一周后取出培养瓶,弃去瓶内培养液,Hank,s液漂洗两次后加相同的培养液5ml继续培养。以后待细胞萌出后,同样方法每周换液两次。(二)传代培养待原代培养细胞生长基本融合成片时即可传代。1、吸出培养瓶内的培养液,Hank,s液漂洗两次,向瓶内加入0.5%的胰蛋白酶溶液少许以覆盖瓶底为度。2、大约1分钟左右,镜下观察细胞胞质回缩,细胞间隙增大时
配制。 实验室内常将胰蛋白酶和EDTA联合使用。可提高消化效率,细胞分散情况改善。 EDTA不能被血清抑制,所以消化后必须彻底清洗。 EDTA对成纤维细胞作用差。 三、胶原酶溶液 1 .用Hank's液配制成2000U/ml 2 .36.5度搅拌溶解1h,4度过
化解离形成细胞悬液,传代培养时也需要将贴壁细胞从瓶壁上消化下来,常用的消化液有胰酶(Trypsin)溶液和EDTA溶液,有时也用胶原酶(collagenase)溶液。 1.胰酶溶液:胰酶活性可用消化酪蛋白的能力表示,常见有1:125和1:250,即一份胰酶可消化125或250份酪蛋白。组织培养用胰酶溶液一般配制成0.1-0.25%浓度,配制时要用不含Ca2+、Mg2+及血清的平衡盐溶液(如前面的D-Hank"s),因为这些物质会对胰酶产生抑制作用。胰酶作用及溶解的最佳pH
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