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文献和实验相关专题 随着分子生物学技术的发展,检测基因结构和突变的方法不断涌现.尤其是PCR技术问 世以后,各种与PCR相结合的基因检测技术进一步推动了基因研究的发展.如不对称 PCR产物的直接测序 、核糖核酸酶酶切法(Ribonuclease cleavage,RNAase)、限制性 片段长度多态性分析(Restriction Fragment Length Polymorphism,RFLP)等等已成 为基因分析的有力工具.但这些方法操作比较
的HBV标品 进行了检测,并对扩增产物进行了SSCP分析,发现每个标本的SSCP图谱完全不同,不仅证明了HBVDNA具有地区性变异,而且排除了交叉性污染的可能性,为保证PCR诊断结果的可靠性找到了好方法。另外,Yap等还将SSCP用于DNA定量分析上,他们将SSCP 与竞争性PCR法相结合进行乳腺癌细胞突变p53基因的定量分析,并取得了初步成功。该方法的优点在于,内标和待测DNA只有一个碱基不同,这样使内标和待测DNA有相同的扩增条件,从而更准确地测出DNA的量。从以上可以看出,SSCP正在分子
2.6kbp的凝血因子IX基因组中,有20处碱基点突变,RNA-SSCP可检测 出其中的70%,而DNA-SSCP只能检测出35%,显示了RNA-SSCP比DNA-SSCP有更高的灵敏 性。 SSCP法除大量地用于基因突变的检测外,还用于病毒的分型、监测PCR实验中的污染 情况、以及病原体传播途径的研究中。Yap用巢式PCR对来自不同国家和地区的HBV标品 进行了检测,并对扩增产物进行了SSCP分析,发现每个标本的SSCP图谱完全不同,不 仅证明了HBVDNA具有地区性变异,而且排除了交叉性污染的可
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