Annexin V Binding Buffer (10×)

Annexin V 凋亡试剂盒常见问题

时样本之间干扰。 Q：说明书上写细胞量为 1~5 × 105 ，细胞量多的话对检测结果有没有影响？ A：建议细胞量最多不要超过 106个，过量的细胞相当于染料被稀释，影响染色和分离效果。一般 2×105 个细胞足够进行凋亡检测了，通常情况下检测 10,000 个细胞就能得到比较好的结果。 Q：是否可以用 PBS 替代凋亡试剂盒里面的 Binding Buffer？ A：不行，Binding Buffer 是必须要加的，Annexin V 与 PS 的结合依赖 Ca2+，Binding

磷脂酰丝氨酸外翻分析（Annexin V法）

染料，它不能透过完整的细胞膜，但在凋亡中晚期的细胞和死细胞，PI能够透过细胞膜而使细胞核红染。因此将Annexin-V与PI匹配使用，就可以将凋亡早晚期的细胞以及死细胞区分开来。方法1、悬浮细胞的染色：将正常培养和诱导凋亡的悬浮细胞（0.5~1×106）用PBS洗2次，加入100ul Binding Buffer和FITC标记的Annexin-V（20ug/ml）10ul,室温避光30min,再加入PI（50ug/ml）5ul,避光反应5min后，加入400ul Binding Buffer，立即

Annexin V detection protocol

in 500 μl of 1X Binding Buffer.     4) Add 5 μl of Annexin V-FITC and 5 μl of propidium iodide (PI, optional.)     5) Incubate at room temperature for 5 min in the dark.     6) Proceed to B or C below depending on method