赛默飞世尔Thermo Fisher UNIVERSAL I

核酸电泳工作流程——5 大主要步骤

2. 次优样品分离。(A) 负载影响条带分辨率。 (B) 上样量过低会导致条带扭曲。 在上样缓冲液中准备好样品和分子量标准，其最终的体积通常占胶孔体积的 30%。由于孔底分布不均匀(图 2B)，使用较少的上样体积会导致条带扭曲。对于含有 DNA 结合蛋白或粘性末端的样品，凝胶上样之前，混合物需加入至 含有 SDS 的上样染料中一同加热，因为蛋白质结合以及 DNA 片段之间的相互作用会导致分离效果不佳。 c .上样染料和缓冲液选择 制备凝胶电泳时，样品中添加了凝胶上样缓冲液 (通常是 6X 或 10

分子实验方法10:测序技术

)：dNTP B溶液再加1.6mmol/L ddTTP。 15、dd C终止混合物(适用于dITP)：dNTP B溶液再加1.6mmol/L ddCTP。 16、测序用T7 DNA 测序酶。 17、酶稀释缓冲液：10mmol/L Tris?HCl，pH7.5，5mmol/L DTT，0.5mg/ml BSA 。 18、终止溶液： 95%甲酰胺，20mmol/L EDTA，0.05%溴酚兰，0.05%二甲苯兰 。 19、[a-32P]dATP 或[a-35S]-dATP，35S的优点

分子实验方法10: 测序技术

1.6mmol/L ddTTP。 15、dd C终止混合物(适用于dITP)：dNTP B溶液再加1.6mmol/L ddCTP。 16、测序用T7 DNA 测序酶。 17、酶稀释缓冲液：10mmol/L Tris・HCl，pH7.5，5mmol/L DTT，0.5mg/ml BSA 。 18、终止溶液： 95%甲酰胺，20mmol/L EDTA，0.05%溴酚兰，0.05%二甲苯兰 。 19、[a-32P]dATP 或[a-35S]-dATP，35S的优点是可使条带为窄而清晰，并且操作更为安全