赛默飞世尔Thermo Fisher N95 PARTICU

RNA介导的基因沉默

的 ULTRAhyb-Oligo 缓冲液（17x 缓冲液）。使用前需在 68℃ 环境中进行溶解。 ( 7 ) 用 0.5 U T4 多核苷酸激酶（PNK，Roche) 和 6 μl  [γ-32P ]  ATP ( 5000 Ci/mmol ) 标记 1 μmol/L DNA 寡核苷酸（约含有 10 个与目的基因互补的 DNA 寡核苷酸）。 ( 8 ) 参照 Hamilton 和 Baulcombe 的方法，在 35°C 条件下进行 RNA 印迹杂交[14]。 3. 注释 注

Southern Hybridization Protocols

in a hybridization, denature the labelled DNA by heating to 95-100 ℃ for 5 min, then chilled on ice.Add 50 m l probes to each hybridization tubeHybridize o/n at 65 ℃Filter washing: preparation of washing solutionW1 = 2SSC-0.5% SDS —> 150ml kept at RT W1 = 0.5SSC

xCELLigence系统内源性GPCRs细胞功能研究

°C ）中进行。细胞培养基为生长培养基，细胞接种密度是 1-2 x 104 细胞每孔，接种于96孔E-Plates 中，并通过xCELLigence 系统进行过夜监测，直至细胞生长至接近满板，复孔检测。预先在另一普通96孔板中每孔中添加 2 µl 药物，并储存于 -20℃。待细胞培养 18-24 小时后，进行药物稀释反应。将药物融解，并添加 132 µl 检测缓冲液（1 x HBSS，Sigma H8264、20mM HEPES，Cellgro 25-060-Cl、0.1% BSA，Fisher