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- 2025年07月15日
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赛默飞
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文献和实验以非那西丁为探针采用高效液相色谱法快速测定细胞色素P450 1A2的酶活性
【摘要】 目的建立一种快速、高效的以非那西丁作为探针药物评价细胞色素P450 1A2（CYP1A2）酶活性的高效液相色谱-紫外检测方法。方法色谱柱为Agilent Zorbax SB-C18柱（50 mm×4.6 mm I.D.，5 μm）；流动相为乙腈-水（含0.01％七氟丁酸），梯度洗脱，流速2.0 ml・min-1；检测波长为244 nm。非那西丁与人CYP1A2酶在37 ℃温孵适当时间后，加入50 μl乙腈终止反应，10 000 g离心后取上清液进样分析测定。结果对乙酰
6. Spin down @ 14K RPM for 2-3'. 7. Resuspend in 100 µl 0.25M Tris pH 7.8 8. Freeze-thaw 3x (10'freeze-10'thaw). 9. Spin down debris @14K RPM for 5'. 10. Transfer 100 µl supernatant to a new set of tubes. 11. Set new set of tubes and add 40
as follows: Cell concentration per milliliter = Total cell count in 4 squares x 2500 x dilution factor Example: If one counted 450 cells after diluting an aliquot of the cell suspension 1:10, the original cell concentration = 450 x 2500 x 10 = 11,250
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