Recombinant Dog IL31, N-His

Recombinant Dog IL31, N-His

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  • ¥1290 - 3960
  • 帛科
  • BK-DB6303
  • 国产
  • 2025年07月12日
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      48

    • 英文名

      Recombinant Dog IL31, N-His

    • 保质期

      12个月

    • 供应商

      上海帛科

    • 保存条件

      -20 to -80 °C

    商品介绍:
    货号 BK-DB6303 用途 仅供科研研究实验
    纯度 >90% as determined by SDS-PAGE. 预测分子量 17.31 kDa
    表达宿主 E.coli 种属 Dog
    内毒素: Please contact with the lab for this information.
    蛋白构建: A DNA sequence encoding the Dog IL31 (Ser24-Gln159) was fused with the N-terminal His Tag.
    制剂: Supplied as solution form in PBS pH 7.4.
    运输方式: In general, proteins are provided as lyophilized powder/frozen liquid. They are shipped out with dry ice/blue ice unless customers require otherwise.
    稳定性&储存: Use a manual defrost freezer and avoid repeated freeze thaw cycles.Store at 2 to 8 °C for one week .Store at -20 to -80 °C for twelve months from the date of receipt.
    复溶: Reconstitute in sterile water for a stock solution.A copy of datasheet will be provided with the products, please refer to it for details.
    分子别名: IL-31, Interleukin-31, IL31,
    Recombinant Dog IL31, N-His
    表达载体在基因工程有以下几种元件:
    (1)选择标志的编码序列;
    (2)可控转录的启动子;
    (3)转录调控序列(转录终止子,核糖体结合位点);
    (4)一个多限制酶切位点接头;
    (5)宿主体内自主复制的序列。

    Recombinant Dog IL31, N-His
    重组蛋白质的诱导表达:
    1. 挑取转化有质粒的单菌落, 接种于 3ml 选择性 LB 液体培养基中, 37 oC,250 rpm/min 振摇培养过夜。
    2. 次日将培养过夜的菌液 500 μl 再接种于 10ml(1:20)选择性 LB 液体培养基 中, 37 oC,250 rpm/min 振摇培养至光密度(OD600=0.6)时,取 1 ml 样本作 为诱导前标本, 10000g 离心 1min 收集菌体沉淀,-20 oC 冻存备用。
    3. 加入 1 mol/L IPTG 于菌液中,使 IPTG 终浓度为 1 mM ,37 oC ,250 rpm/min 振摇培养 4 ~ 5 小时。取 1 ml 样本作为诱导后标本,同上法收集菌体沉淀, -20 oC 冻存备用。
    4. 将诱导前后菌体沉淀用 20 ~ 40 μl PBS(pH= 8.0)重悬, 加入等体积的 2×SDS 上样缓冲液, 煮沸加热 5min,SDS 聚凝胶(SDS-PAGE)电泳分离 , 考马斯亮蓝染色 3 小时后,脱色观察结果。
    5. 选取诱导成功的细菌克隆,扩大诱导规模,收集菌体沉淀,于- 20 oC 保存,准备做下一步分析及纯化。
    公司出售的相关产品:

     
    ATP依赖RNA解旋酶DDX46封闭多肽 磷酸化细胞核因子抗体
    丙氨酸蛋白激酶C底物Marck封闭多肽 SHKBP1 Antibody Blocking Peptide
    细胞信号转导分子mad-1封闭多肽 Gentamicin/OVA
    酪蛋白激酶1结合蛋白封闭多肽 Acetyl-Histone H3 (K23) Antibody Blocking Peptide
    二甲基组蛋白H2B K5封闭多肽 DPH3 Antibody Blocking Peptide
    细胞分裂周期2样蛋白激酶5封闭多肽 NUP205 Antibody Blocking Peptide
    黑色素瘤相关抗原gp100封闭多肽 CD168/RHAMM Antibody Blocking Peptide
    细胞骨架相关蛋白4封闭多肽 KLK10 Antibody Blocking Peptide
    H3T3B1蛋白封闭多肽 Complement component C9b Antibody Blocking Peptide
    半胱胺酸蛋白酶蛋白-6封闭多肽 DHRS4L2 Antibody Blocking Peptide
    磷酸化原癌基因c-Raf封闭多肽 SNPH Antibody Blocking Peptide
    磷酸化肿瘤易感候选基因3封闭多肽 phospho-PRKAA1 (Ser356) Antibody Blocking Peptide
    癌/睾丸抗原128封闭多肽 Recombinant Dog IL31, N-HisKIAA0323 Antibody Blocking Peptide
      DTNBP1 Antibody Blocking Peptide
    重组人3-磷酸甘油醛脱氢酶蛋白 C6orf115 Antibody Blocking Peptide
    重组蛋白质的可溶性鉴定:
    1. 将按上法诱导培养后收集的菌体重悬于裂解液 1 (Lysis buffer under native conditions )中,然后在-80 oC 低温冰箱中放置 10 min。
    2. 冰中解冻。
    3. 在冰浴上用超声破碎仪破菌 6 次, 每次 10 sec,间歇 10 sec,电压 200-300 V。
    4. 10000g,4oC,离心 20min,取上清(为溶液 A), - 20 oC 保存; 另将沉淀用 同样裂解液 1 溶解(为溶液 B),同样 -20 oC 保存,供后继分析使用。
    5. 将上述 A、B 溶液和诱导前后的细菌进行 SDS-PAGE 电泳, 考马斯亮蓝染色, 比较分析重组蛋白质的溶解性。如果诱导表达的蛋白质位于 A 溶液中, 则为可溶性蛋白;如果是在 B 溶液中,则为非可溶蛋白。

    Recombinant Dog IL31, N-His
    重组蛋白质的分离纯化:
    1. 将菌体沉淀溶于适量裂解液 2(Lysis buffer under denaturing conditions )中,室温下搅拌和吹打沉淀,避免泡沫生成。
    2. 10000g ,4 oC,离心 30 min,收集上清液。
    3. 将 Ni-NTAAgarose 充填柱子,并连接于 Pharmarcia 低压液相层析系统,用 5 倍柱体积的裂解液 2 平衡 Ni-NTAAgarose,调节 A280 值至零线。
    4. 将适量上清液上样到 Ni-NTAAgarose 柱子中, 并用 lysis buffer 冲洗至 A280 值低于 0.01。
    5. 分别用 5 ~ 10 倍柱体积的清洗液 1 和清洗液 2(Washbuffer 1 and 2)清洗柱 子,直至 A280 值低于 0.01。
    6. 用洗脱液(Elution buffer)洗脱重组蛋白质, 在 A280 值监测下,收集出现峰 线后含有重组蛋白的所有洗脱液。

     

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