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组织核蛋白提取试剂盒

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      2-8℃

    • 规格

      50T

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    使用注意事项:
     旋帽离心管装的试剂在开盖前请短暂离心,将盖内壁上的液体甩至管底,避免开盖时液体洒落。
     实验过程中的所有试剂须预冷;所有器具须放-20℃冰箱预冷。整个过程须保持样品处于低温。
     蛋白酶抑制剂在2-8℃时是固体状态,从冰箱取出后恢复至室温或37℃短时间水浴,变成液体状态后离心至管底部再开盖。

     

     

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    1.蛋白浓度低?
    处理部分样本时可能没有裂解完全,导致核蛋白/膜蛋白浓度低。只要适当延长试剂BC的处理时间即可。最好在持续振荡的条件下处理,没有振荡器也可间隔几分钟用吸头吹打混匀。
    膜蛋白丰度较低,在条件允许的情况下,需要尽可能加大细胞的上样量。

    2.用什么方法定量蛋白?
    建议用BCA法。不适合用Bradford法,因为试剂A中含有干扰Bradford法的组份,导致定量不准。如果已经进行过透析处理或者用脱盐柱改换过缓冲体系,则可以用Bradford法定量。

    3.提取时出现胶状沉淀?
    核蛋白提取液处理产物中有时会出现少量透明胶状物,属正常现象。该透明胶状物为含有基因组DNA等的复合物。不检测和基因组DNA结合特别紧密的特定蛋白的情况下,可以直接离心取上清进行后续实验即可;如果需要检测和基因组结合特别紧密的蛋白,则可以通过超声处理,300w/10秒间隔10秒,超声3分钟,随后离心取上清用于后续实验。检测一些常见的转录因子,例如NF-kappaB、p53等时,不必进行超声处理。

     

     

    1.Yu Liu, et al.
    HIV-1 Protein Tat1–72 Impairs Neuronal Dendrites via Activation of PP1 and Regulation of the CREB/BDNF Pathway
    Virologica Sinica 2018

    2.Yan Li, et al.
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    OncoTargets and Therapy 2018

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