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文献和实验probe amplification,MS-MLPA) Anders O.H.等2005年改进MLPA[44]为MS-MLPA[45]用于检测特异位点的甲基化。MS-MLPA中,针对甲基化的和非甲基化的位点分别设计两个探针,每个探针都包括两个寡核苷酸部分,其中短的部分由合成产生,长的部分来源于phageM13的衍生物,后者有一个非杂交填充片段,不同探针其长度不同。探针的两个寡核苷酸杂交序列均与目标序列互补,其末端都连有相同的PCR引物。且要求[45]设计的MS-MLPA的探针要有甲基化敏感的限制性内切
E.coli 的乳糖操纵子(元)含Z、Y及A三个结构基因,分别编码半乳糖苷酶、透酶和乙酰基转移酶,此外还有一个操纵序列O、一个启动子序列P及一个调节基因I.I基因编码一种阻遏蛋白,后者与O序列结合,使操纵子(元)受阻遏而处于关闭状态. 在启动序列P上游还有一个分解(代谢)物基因激活蛋白(CAP)结合位点.由P序列、O序列和CAP结合位点共同构成lac操纵子的调控区,三个酶的编码基因即由同一调控区调节,实现基因产物的协调表达 。 在没有乳糖存在时,lac操纵子(元)处于阻遏
一、实验原理 DNA重组技术的第一步是从不同来源的DNA上将待克隆的DNA片段特异性切下,同时在载体DNA分子(一般为质粒DNA)上打开相应的缺口,然后将两者连接成重组DNA分子。这一特异性的切割过程常由特定的限制性核酸内切酶来完成。 目前在细菌中发现有600多种限制性核酸内切酶,根据其性质的不同可分为三大类,分别为I、II和III类:I类酶识别部位和切点不同,切断部位不定;III类酶的识别部位和切点不同
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