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- 详细信息
- 技术资料
- 库存:
54
- 英文名:
Recombinant Human GDF11 protein , N- His Tag
- 保质期:
12个月
- 供应商:
上海帛科
- 保存条件:
-20 to -80 °C
- 规格:
50μg、100ug 、1mg
重组蛋白质的可溶性鉴定:
1. 将按上法诱导培养后收集的菌体重悬于裂解液 1 (Lysis buffer under native conditions )中,然后在-80 oC 低温冰箱中放置 10 min。
2. 冰中解冻。
3. 在冰浴上用超声破碎仪破菌 6 次, 每次 10 sec,间歇 10 sec,电压 200-300 V。
4. 10000g,4oC,离心 20min,取上清(为溶液 A), - 20 oC 保存; 另将沉淀用 同样裂解液 1 溶解(为溶液 B),同样 -20 oC 保存,供后继分析使用。
5. 将上述 A、B 溶液和诱导前后的细菌进行 SDS-PAGE 电泳, 考马斯亮蓝染色, 比较分析重组蛋白质的溶解性。如果诱导表达的蛋白质位于 A 溶液中, 则为可溶性蛋白;如果是在 B 溶液中,则为非可溶蛋白。
商品介绍:
内毒素: Please contact with the lab for this information.
蛋白构建: A DNA sequence encoding the Human GDF11 (Asn299-Ser407 ) was fused with the N-terminal His Tag
制剂: Supplied as solution form in PBS, pH7.5 or lyophilized from PBS, pH7.5 .
运输方式: In general, proteins are provided as lyophilized powder. They are shipped out with blue ice unless customers require otherwise.
稳定性&储存: Use a manual defrost freezer and avoid repeated freeze thaw cycles.Store at 2 to 8 °C for one week .Store at -20 to -80 °C for twelve months from the date of receipt.
分子别名: Bone morphogenetic protein 11,Bone morphogenetic protein 11,BMP-11,BMP11
重组蛋白质的分离纯化:
1. 将菌体沉淀溶于适量裂解液 2(Lysis buffer under denaturing conditions )中,室温下搅拌和吹打沉淀,避免泡沫生成。
2. 10000g ,4 oC,离心 30 min,收集上清液。
3. 将 Ni-NTAAgarose 充填柱子,并连接于 Pharmarcia 低压液相层析系统,用 5 倍柱体积的裂解液 2 平衡 Ni-NTAAgarose,调节 A280 值至零线。
4. 将适量上清液上样到 Ni-NTAAgarose 柱子中, 并用 lysis buffer 冲洗至 A280 值低于 0.01。
5. 分别用 5 ~ 10 倍柱体积的清洗液 1 和清洗液 2(Washbuffer 1 and 2)清洗柱 子,直至 A280 值低于 0.01。
6. 用洗脱液(Elution buffer)洗脱重组蛋白质, 在 A280 值监测下,收集出现峰 线后含有重组蛋白的所有洗脱液。
表达载体在基因工程有以下几种元件:
(1)选择标志的编码序列;
(2)可控转录的启动子;
(3)转录调控序列(转录终止子,核糖体结合位点);
(4)一个多限制酶切位点接头;
(5)宿主体内自主复制的序列。
重组蛋白质的诱导表达:
1. 挑取转化有质粒的单菌落, 接种于 3ml 选择性 LB 液体培养基中, 37 oC,250 rpm/min 振摇培养过夜。
2. 次日将培养过夜的菌液 500 μl 再接种于 10ml(1:20)选择性 LB 液体培养基 中, 37 oC,250 rpm/min 振摇培养至光密度(OD600=0.6)时,取 1 ml 样本作 为诱导前标本, 10000g 离心 1min 收集菌体沉淀,-20 oC 冻存备用。
3. 加入 1 mol/L IPTG 于菌液中,使 IPTG 终浓度为 1 mM ,37 oC ,250 rpm/min 振摇培养 4 ~ 5 小时。取 1 ml 样本作为诱导后标本,同上法收集菌体沉淀, -20 oC 冻存备用。
4. 将诱导前后菌体沉淀用 20 ~ 40 μl PBS(pH= 8.0)重悬, 加入等体积的 2×SDS 上样缓冲液, 煮沸加热 5min,SDS 聚凝胶(SDS-PAGE)电泳分离 , 考马斯亮蓝染色 3 小时后,脱色观察结果。
5. 选取诱导成功的细菌克隆,扩大诱导规模,收集菌体沉淀,于- 20 oC 保存,准备做下一步分析及纯化。
公司出售的相关产品:
1. 将按上法诱导培养后收集的菌体重悬于裂解液 1 (Lysis buffer under native conditions )中,然后在-80 oC 低温冰箱中放置 10 min。
2. 冰中解冻。
3. 在冰浴上用超声破碎仪破菌 6 次, 每次 10 sec,间歇 10 sec,电压 200-300 V。
4. 10000g,4oC,离心 20min,取上清(为溶液 A), - 20 oC 保存; 另将沉淀用 同样裂解液 1 溶解(为溶液 B),同样 -20 oC 保存,供后继分析使用。
5. 将上述 A、B 溶液和诱导前后的细菌进行 SDS-PAGE 电泳, 考马斯亮蓝染色, 比较分析重组蛋白质的溶解性。如果诱导表达的蛋白质位于 A 溶液中, 则为可溶性蛋白;如果是在 B 溶液中,则为非可溶蛋白。
商品介绍:
| 货号 | BK-DB5685 | 用途 | 仅供科研研究实验 |
| 纯度 | >90% as determined by SDS-PAGE | 预测分子量 | 12.99 kDa |
| 表达宿主 | E.coli | 种属 | Homo sapiens (Human) |
蛋白构建: A DNA sequence encoding the Human GDF11 (Asn299-Ser407 ) was fused with the N-terminal His Tag
制剂: Supplied as solution form in PBS, pH7.5 or lyophilized from PBS, pH7.5 .
运输方式: In general, proteins are provided as lyophilized powder. They are shipped out with blue ice unless customers require otherwise.
稳定性&储存: Use a manual defrost freezer and avoid repeated freeze thaw cycles.Store at 2 to 8 °C for one week .Store at -20 to -80 °C for twelve months from the date of receipt.
分子别名: Bone morphogenetic protein 11,Bone morphogenetic protein 11,BMP-11,BMP11
重组蛋白质的分离纯化:
1. 将菌体沉淀溶于适量裂解液 2(Lysis buffer under denaturing conditions )中,室温下搅拌和吹打沉淀,避免泡沫生成。
2. 10000g ,4 oC,离心 30 min,收集上清液。
3. 将 Ni-NTAAgarose 充填柱子,并连接于 Pharmarcia 低压液相层析系统,用 5 倍柱体积的裂解液 2 平衡 Ni-NTAAgarose,调节 A280 值至零线。
4. 将适量上清液上样到 Ni-NTAAgarose 柱子中, 并用 lysis buffer 冲洗至 A280 值低于 0.01。
5. 分别用 5 ~ 10 倍柱体积的清洗液 1 和清洗液 2(Washbuffer 1 and 2)清洗柱 子,直至 A280 值低于 0.01。
6. 用洗脱液(Elution buffer)洗脱重组蛋白质, 在 A280 值监测下,收集出现峰 线后含有重组蛋白的所有洗脱液。
表达载体在基因工程有以下几种元件:
(1)选择标志的编码序列;
(2)可控转录的启动子;
(3)转录调控序列(转录终止子,核糖体结合位点);
(4)一个多限制酶切位点接头;
(5)宿主体内自主复制的序列。
重组蛋白质的诱导表达:
1. 挑取转化有质粒的单菌落, 接种于 3ml 选择性 LB 液体培养基中, 37 oC,250 rpm/min 振摇培养过夜。
2. 次日将培养过夜的菌液 500 μl 再接种于 10ml(1:20)选择性 LB 液体培养基 中, 37 oC,250 rpm/min 振摇培养至光密度(OD600=0.6)时,取 1 ml 样本作 为诱导前标本, 10000g 离心 1min 收集菌体沉淀,-20 oC 冻存备用。
3. 加入 1 mol/L IPTG 于菌液中,使 IPTG 终浓度为 1 mM ,37 oC ,250 rpm/min 振摇培养 4 ~ 5 小时。取 1 ml 样本作为诱导后标本,同上法收集菌体沉淀, -20 oC 冻存备用。
4. 将诱导前后菌体沉淀用 20 ~ 40 μl PBS(pH= 8.0)重悬, 加入等体积的 2×SDS 上样缓冲液, 煮沸加热 5min,SDS 聚凝胶(SDS-PAGE)电泳分离 , 考马斯亮蓝染色 3 小时后,脱色观察结果。
5. 选取诱导成功的细菌克隆,扩大诱导规模,收集菌体沉淀,于- 20 oC 保存,准备做下一步分析及纯化。
公司出售的相关产品:
| 钠/钾转运ATP酶相互作用蛋白2封闭多肽 | 糖原合酶激酶-3β抗体 |
| 蛋白酶体激活因子PA28γ封闭多肽 | 原癌基因蛋白/活化蛋白1抗体 |
| 巨噬细胞炎症蛋白-1γ封闭多肽 | Gm13152蛋白抗体 |
| 卷曲螺旋结构域蛋白62封闭多肽 | 去整合素样金属蛋白酶18抗体 |
| 转移生长因子β2封闭多肽 | PRAM1蛋白抗体 |
| 自噬相关蛋白3封闭多肽 | 腺苷酸活化蛋白激酶γ1抗体 |
| 肌收缩蛋白MYOT封闭多肽 | CSMD1抗体 |
| 抗Ⅵ型胶原封闭多肽 | 白介素-17D抗体 |
| 白介素17受体D封闭多肽 | G蛋白偶联受体141抗体 |
| 4号染色体开放阅读款 | 新型血小板相关血管内皮分泌蛋白SCUBE1抗体 |
| 金属蛋白酶组织抑制因子-2封闭多肽 | ZYG11BL蛋白抗体 |
| G蛋白偶联受体GPR161蛋白封闭多肽 | 多配体聚糖结合蛋白1抗体 |
| PUM1蛋白封闭多肽 | Recombinant Human GDF11 protein , N- His Tag磷酸二酯酶1C抗体 |
| 腺苷三磷酸结合盒转运体A1封闭多肽 | 恶性纤维组织细胞瘤抗体 |
| 锌指蛋白777封闭多肽 | SWI/SNF相关基质关联肌动蛋白依赖染色质调控因子亚家族C1抗体 |
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