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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 英文名:
PET Particles
- 库存:
100
- 供应商:
百欧泰(biotyscience)
- 规格:
10 mg/ml10ml
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文献和实验3μg pET载体 3μl 10×限制性内切酶buffer 10-20U 两种酶(是否共用buffer; 酶体积不要超过反应体系的10%) 3μl 1mg/ml乙酰BSA(根据需要 补足水到30μl 2)37℃温浴2-4h 3)取3μl样品进行电泳检测消化反应进行的程度 4)消化完全后,加入0.05U小牛碱性磷酸酶,37℃ 30min 5)全部样品在1%琼脂糖胶上电泳
3μg pET载体 3μl 10×限制性内切酶buffer 10-20U 两种酶(是否共用buffer; 酶体积不要超过反应体系的10%) 3μl 1mg/ml乙酰BSA(根据需要 补足水到30μl 2)37℃温浴2-4h 3)取3μl样品进行电泳检测消化反应进行的程度 4)消化完全后,加入0.05U小牛碱性磷酸酶,37℃ 30min 5)全部样品在1%琼脂糖胶上电泳
进行测序验证,保证读码框正确,即没有移码。 (4)长期保存的pET重组子在高浓度甘油(19%)中会导致质粒不稳定。 (5)T7lac启动子是严谨启动子,IPTG诱导时可以优化最佳浓度(25uM-1mM之间)使目的蛋白达到最佳的活性和溶解性。 (6)37℃生长常常会使一些蛋白累积形成包涵体,而30℃生长则可能产生可溶的和有活性的蛋白。在某些情况下,低温(15-20℃)延长诱导时间(过夜)可以使溶解性蛋白的产量达到最大。 (7)进行SDS-PAGE分析时,需优化电泳上样体积。
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