- ￥1800
- BestBio贝博
- BB-410382-50T
- 上海
- 2025年07月11日
企业认证
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
大量
- 供应商：
贝博
- 保存条件：
2-8℃
- 规格：
50T
BB-410382-50T
1.长期不用可以-20℃保存。
2.Annexin V-Alexa Fluor 660染色液避免反复冻融。多次冻融会导致失效。
3.Annexin V-Alexa Fluor 660染色液需要长期保存时可以根据情况进行小量分装后-20℃保存。
4.试剂拆封后请尽快使用完！
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文献和实验样品染色：
1. 离心收集悬浮细胞。离心机300-500×g力，2-8°C，离心时间5分钟，弃培养基。
2. 用冷PBS洗涤细胞两次。（300×g -400×g，2-8°C，离心时间5分钟收集细胞）。
3. 用100 μl 1X Annexin V结合液悬浮细胞，浓度大约为1-5 X 106 cells/ml。
4. 在细胞悬浮液中加入5 μl Annexin V- Alexa Fluor 660染色液，加入1 μl NucGreen D染色液，轻轻混匀后于2-8°C避光条件下孵育15-30分钟。
5. 加入400 μl PBS或1X Annexin V结合液，轻轻混匀。
6. 立即用流式细胞仪检测。
流式细胞仪分析：
经处理过的细胞此时可以在流式细胞仪上分析。
按照常规的流式凋亡检测的操作即可。
Annexin V- Alexa Fluor 660的荧光最大激发波长662 nm，最大发射波长682 nm；NucGreen D荧光最大激发波长502 nm，最大发射波长在526 nm。
上机检测前，须用待测细胞制备质控样本来设定流式细胞仪的荧光补偿和设置十字门的范围：
（I） 未进行其它荧光标记的细胞
① 空白管：阴性对照组细胞，没有染色的细胞。不加Annexin V/ Alexa Fluor 660，NucGreen D。用于调节电压。
② 单染管：有明显凋亡的细胞，只加Annexin V/ Alexa Fluor 660染色。用于调节补偿。
③ 单染管：有明显凋亡的细胞，只加NucGreen D染色。用于调节补偿
④ 检测管：待测的处理细胞，加Annexin V/ Alexa Fluor 660，NucGreen D。用空白管和单阳管调节好电压补偿后，获得所需要的流式数据。
（II） 有其它荧光标记的细胞
① 未标记其它荧光空白管：未标记其它颜色的细胞，阴性对照组细胞，没有染色的细胞。不加Annexin V/ Alexa Fluor 660，NucGreen D。用于调节电压。
② 有其它颜色的空白管：有其它颜色的对照组细胞，没有染色的细胞。不加Annexin V/ Alexa Fluor 660，NucGreen D。用于调补偿
③ 未标记其它荧光单染管：未标记其它荧光且有明显凋亡的细胞，只加Annexin V/ Alexa Fluor 660染色。用于调节补偿。
④ 未标记其它荧光单染管：未标记其它荧光且有明显凋亡的细胞，只加NucGreen D染色。用于调节补偿
⑤ 检测管：待测的处理细胞，加Annexin V/ Alexa Fluor 660，NucGreen D。用空白管和单阳管调节好电压补偿后，获得所需要的流式数据。
【注】：
具体流式设置按常规方法即可。请参照流式细胞仪说明书或咨询仪器技术支持。
