CD3 Recombinant Mouse mAb

Western实验常用于定量或定性确定组织或细胞中蛋白质的表达情况。CD3 Recombinant Mouse mAb产品应用Western blot实验步骤(仅供参考)：
准备工作：

    样本制备：
        提取蛋白质样本，可以是细胞总蛋白提取物或组织样本的裂解提取物。
        根据需要，可以用蛋白质酶抑制剂和磷酸酶抑制剂等添加到裂解液中，以保持蛋白质的完整性。

    蛋白质定量：
        使用BCA法、Bradford法或其他蛋白质定量方法测量提取的蛋白质浓度。

    SDS-PAGE凝胶制备：
        根据所研究蛋白质的大小和数量，选择合适浓度和厚度的SDS-PAGE凝胶。
        制备上胶缓冲液和下胶缓冲液。

    电泳：
        将样品加入到凝胶孔中，进行蛋白质电泳分离。
        使用恒定电流或恒定电压条件进行电泳，直到蛋白质样品进入分离凝胶。

转移：

    半干法转移：
        将分离的蛋白质从凝胶转移到膜上（如PVDF或NC膜）。
        准备转移缓冲液和转移装置（如Semi-Dry Transfer系统）。
        转移条件通常为约1小时至2小时。

免疫检测：

    封闭：
        使用牛血清白蛋白（BSA）、非脂奶粉或其它的蛋白质作为阻断剂，封闭膜上非特异性结合位点。

    一抗孵育：
        加入稀释后的第一抗体（primary antibody），使其与膜上的目标蛋白结合。
        孵育时间和温度根据抗体厂家推荐，通常为1小时至过夜。

    洗涤：
        用TBST或PBS等缓冲液洗膜，去除未结合的第一抗体。

    二抗孵育：
        加入与第一抗体宿主种类不同的酶标记的二抗（secondary antibody），使其与第一抗体结合。
        二抗通常是抗兔、抗鼠、抗人等。
        孵育时间和温度根据二抗厂家推荐，通常为1小时。

    洗涤：
        用TBST或PBS等缓冲液洗膜，去除未结合的二抗。

    显色：
        使用化学发光或染色剂（如TMB、DAB、ECL等）检测酶标记的二抗与膜结合的目标蛋白质。

    成像和分析：
        使用Western blot成像系统（如化学发光成像系统）获取蛋白条带的图像。
        使用分析软件测量和分析蛋白条带的强度和大小。

注意事项：

    每一步的条件和实验设定应根据具体的蛋白质和抗体特性进行优化。
    保持实验环境清洁，避免污染和交叉污染。
    记录详细的实验步骤和条件，以便复现和比较不同批次实验结果。

上海圻明生物公司优势供应CD3 Recombinant Mouse mAb。欢迎新老客户垂询。