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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存:
53
- 英文名:
Mycoplasma prevention reagent
- 供应商:
上海联祖
- 规格:
500μl
英文名称:Mycoplasma prevention reagent
产品规格:500μl
发货周期:1~3天
产品价格:询价
| 货号 | 规格 | 发货期 | 用途 |
| LZ-PYJ4502 | 500μl | 1~3天 | 仅供科研实验 |
产品组分
Mycoplasma Prevention Reagent 500μL
说明书 1份
保存:2~8℃,有效期6个月。
注意事项
收到Mycoplasma Prevention Reagent后,请简单做离心处理离心(3000rpm,3~5s),将管壁和管口的液滴离心至底部。避免不必要的浪费。产品出现沉淀属正常现象,在分装和使用前须在室温下溶解至澄清透明状,建议现配现用,不影响产品的使用效果。
使用方法
推荐稀释比例为1:2000,比如:10μL的Mycoplasma Prevention Reagent加入到20mL的培养基中。
建议根据细胞的周期不一样,每2~3天移除并更换含有培养基的新鲜的支原体预防试剂,长期处理,以预防支原体污染。
培养基的计数方法:
一、稀释涂布平板法(亦称活菌计数法)是一种常用的微生物计数方法,其原理是当样品的稀释度足够高时,培养基表面生长的一个菌落来源于样品稀释液中的一个活菌。通过统计平板上的菌落数,可以推测出样品中大约含有多少活菌。这种方法操作简便,适用于菌体大小和质量都相近的类群,如细菌、酵母菌等的计数。计算公式为每克样品中的菌株数=C/V*M,其中C代表某一稀释度下平板上生长的平均菌落数,V代表涂布平板时所用的稀释液的体积(mL),M代表稀释倍数。
二、显微镜直接计数法利用特定细菌计数板或血细胞计数板,在显微镜下计算一定容积的样品中微生物数量。这种方法不能区分死菌与活菌,但可以估算出1mL培养中液中细胞个数,计算公式为1mL 培养中液中细胞个数=小方格中细胞平均数×400 ×104×稀释倍数(个/mL)。显微镜直接计数法的缺点是不能区分死菌与活菌,因此计数到的细胞数包括了死亡的细胞数。
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培养基操作步骤:
一、用法:称取本品33.0g,加热溶解于1000ml蒸馏水中,分装三角瓶,121℃高压灭菌15分钟,备用。
二、配料:首先,根据培养基的配方,准确称量各种成分,包括粉状和非粉状的成分,如肉膏等,放入烧杯中。
三、溶化:向烧杯中加入适量的水,然后搅拌以溶解各成分。对于含有琼脂的培养基,应注意防止外溢,并在溶化过程中保持搅拌。
四、矫正pH:在培养基溶解均匀并冷却至室温后,使用pH试纸测量pH值,然后根据需要加入酸或碱来调整至合适的pH值。
五、澄清过滤:使用滤纸或多层纱布对培养基进行过滤,以去除杂质。
六、分装:将制备好的培养基分装入试管内或三角瓶内,确保管(瓶)口塞上棉塞,以防止外界微生物污染。
七、灭菌:对分装好的培养基进行灭菌处理,通常是通过高压灭菌来确保无菌环境。
八、检定:灭菌后的培养基可以进行质量检定,以确保其符合使用要求。
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文献和实验污染不除,实验结果势必或多或少产生偏差,故进行实验前,确定细胞为mycoplasma-free至关重要,实验结果之数据才有意义。 支原体污染一般来源于血清,实验仪器、培养基或其他试剂蔓延开来。怎样预防和去除支原体污染呢?一般只有三种抗生素(四环素,大环内脂和喹诺酮)能有效对付支原体。在低浓度时,这些抗生素不会产生耐药性,且对哺乳动物细胞的毒性较小。四环素和大环内酯能结合30S和50S核糖体亚基,从而抑制蛋白质合成,喹诺酮抑制DNA旋转酶。因此可以在细菌DNA复制及蛋白质合成两个层面上抑制
污染 支原体是细胞培养中最常见的,干扰实验结果的一种污染。但由于不易被察觉,有些污染的细胞仍在继续使用。据查,目前各实验室使用的二倍体细胞和传代细胞中约有11%受到支原体污染。因此,对支原体污染应严加防范。支原体污染的来源包括工作环境的污染、操作者本身的污染(一些支原体在人体是正常菌群)、培养基的污染、污染支原体的细胞造成的交叉污染、实验器材带来的污染和用来制备细胞的原始组织或器官的污染。组织细胞培养工作中,主要从以下几个方面来预防支原体的污染:控制环境污染;严格实验操作;细胞
污染,有以下几种方法,只不过结果会与原始的细胞特性有差异。去除支原体污染: 1、抗生素处理:BM-cyclin(Roche),MRA(mycoplasma removal agent,ICN),Ciprofloxcin(Bayer),Enrofloxacin(Bayer) 2、Nucleic acid metabolites:5-bromouracil,Hoechst 33258,bromodeoxyuridine 3、Anti-sera预防与控制方面可从以下
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