- ￥1290 - 3960
- 帛科
- BK-DB4623
- 国产
- 2025年07月12日
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- 详细信息
- 技术资料
- 库存：
33
- 英文名：
Recombinant Human CCL7/MCP-3, N-His
- 保质期：
12个月
- 供应商：
上海帛科
- 保存条件：
-20 to -80 °C
- 规格：
100μg、1mg
重组蛋白质的可溶性鉴定：
1. 将按上法诱导培养后收集的菌体重悬于裂解液 1 (Lysis buffer under native conditions )中，然后在－80 oC 低温冰箱中放置 10 min。
2. 冰中解冻。
3. 在冰浴上用超声破碎仪破菌 6 次， 每次 10 sec，间歇 10 sec，电压 200-300 V。
4. 10000g，4oC，离心 20min，取上清（为溶液 A）， － 20 oC 保存； 另将沉淀用 同样裂解液 1 溶解（为溶液 B），同样 －20 oC 保存，供后继分析使用。
5. 将上述 A、B 溶液和诱导前后的细菌进行 SDS-PAGE 电泳， 考马斯亮蓝染色， 比较分析重组蛋白质的溶解性。如果诱导表达的蛋白质位于 A 溶液中， 则为可溶性蛋白；如果是在 B 溶液中，则为非可溶蛋白。
商品介绍：
内毒素: Please contact with the lab for this information.
蛋白构建: A DNA sequence encoding the Human CCL7 / MCP-3(Gln24-Leu99) was fused with the N-His Tag.
制剂: 0.01M PBS, pH 7.4, 0.02% NLS
运输方式: In general, proteins are provided as lyophilized powder/frozen liquid. They are shipped out with dry ice/blue ice unless customers require otherwise.
稳定性&储存: Use a manual defrost freezer and avoid repeated freeze thaw cycles.Store at 2 to 8 °C for one week .Store at -20 to -80 °C for twelve months from the date of receipt.
复溶: Reconstitute in sterile water for a stock solution.A copy of datasheet will be provided with the products, please refer to it for details.
分子别名: C-C motif chemokine 7, MCP-3, CCL7, Monocyte chemotactic protein 3, Monocyte chemoattractant protein 3, NC28, Small-inducible cytokine A7, SCYA6, SCYA7, MCP3
重组蛋白质的分离纯化：
1. 将菌体沉淀溶于适量裂解液 2（Lysis buffer under denaturing conditions ）中，室温下搅拌和吹打沉淀，避免泡沫生成。
2. 10000g ，4 oC，离心 30 min，收集上清液。
3. 将 Ni-NTAAgarose 充填柱子，并连接于 Pharmarcia 低压液相层析系统，用 5 倍柱体积的裂解液 2 平衡 Ni-NTAAgarose，调节 A280 值至零线。
4. 将适量上清液上样到 Ni-NTAAgarose 柱子中， 并用 lysis buffer 冲洗至 A280 值低于 0.01。
5. 分别用 5 ～ 10 倍柱体积的清洗液 1 和清洗液 2（Washbuffer 1 and 2）清洗柱 子，直至 A280 值低于 0.01。
6. 用洗脱液（Elution buffer）洗脱重组蛋白质， 在 A280 值监测下，收集出现峰 线后含有重组蛋白的所有洗脱液。
表达载体在基因工程有以下几种元件：
（1）选择标志的编码序列；
（2）可控转录的启动子；
（3）转录调控序列(转录终止子，核糖体结合位点)；
（4）一个多限制酶切位点接头；
（5）宿主体内自主复制的序列。
重组蛋白质的诱导表达：
1. 挑取转化有质粒的单菌落， 接种于 3ml 选择性 LB 液体培养基中， 37 oC，250 rpm/min 振摇培养过夜。
2. 次日将培养过夜的菌液 500 μl 再接种于 10ml（1:20）选择性 LB 液体培养基 中， 37 oC，250 rpm/min 振摇培养至光密度（OD600=0.6）时，取 1 ml 样本作 为诱导前标本， 10000g 离心 1min 收集菌体沉淀，－20 oC 冻存备用。
3. 加入 1 mol/L IPTG 于菌液中，使 IPTG 终浓度为 1 mM ，37 oC ，250 rpm/min 振摇培养 4 ～ 5 小时。取 1 ml 样本作为诱导后标本，同上法收集菌体沉淀， -20 oC 冻存备用。
4. 将诱导前后菌体沉淀用 20 ~ 40 μl PBS（pH= 8.0）重悬， 加入等体积的 2×SDS 上样缓冲液， 煮沸加热 5min，SDS 聚凝胶（SDS-PAGE）电泳分离 ， 考马斯亮蓝染色 3 小时后，脱色观察结果。
5. 选取诱导成功的细菌克隆，扩大诱导规模，收集菌体沉淀，于－ 20 oC 保存，准备做下一步分析及纯化。
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1. 将按上法诱导培养后收集的菌体重悬于裂解液 1 (Lysis buffer under native conditions )中，然后在－80 oC 低温冰箱中放置 10 min。
2. 冰中解冻。
3. 在冰浴上用超声破碎仪破菌 6 次， 每次 10 sec，间歇 10 sec，电压 200-300 V。
4. 10000g，4oC，离心 20min，取上清（为溶液 A）， － 20 oC 保存； 另将沉淀用 同样裂解液 1 溶解（为溶液 B），同样 －20 oC 保存，供后继分析使用。
5. 将上述 A、B 溶液和诱导前后的细菌进行 SDS-PAGE 电泳， 考马斯亮蓝染色， 比较分析重组蛋白质的溶解性。如果诱导表达的蛋白质位于 A 溶液中， 则为可溶性蛋白；如果是在 B 溶液中，则为非可溶蛋白。
商品介绍：
| 货号 | BK-DB4623 | 用途 | 仅供科研研究实验 |
| 纯度 | >90% as determined by SDS-PAGE. | 预测分子量 | 11.25 kDa |
| 表达宿主 | E. coli | 种属 | Human |
蛋白构建: A DNA sequence encoding the Human CCL7 / MCP-3(Gln24-Leu99) was fused with the N-His Tag.
制剂: 0.01M PBS, pH 7.4, 0.02% NLS
运输方式: In general, proteins are provided as lyophilized powder/frozen liquid. They are shipped out with dry ice/blue ice unless customers require otherwise.
稳定性&储存: Use a manual defrost freezer and avoid repeated freeze thaw cycles.Store at 2 to 8 °C for one week .Store at -20 to -80 °C for twelve months from the date of receipt.
复溶: Reconstitute in sterile water for a stock solution.A copy of datasheet will be provided with the products, please refer to it for details.
分子别名: C-C motif chemokine 7, MCP-3, CCL7, Monocyte chemotactic protein 3, Monocyte chemoattractant protein 3, NC28, Small-inducible cytokine A7, SCYA6, SCYA7, MCP3
重组蛋白质的分离纯化：
1. 将菌体沉淀溶于适量裂解液 2（Lysis buffer under denaturing conditions ）中，室温下搅拌和吹打沉淀，避免泡沫生成。
2. 10000g ，4 oC，离心 30 min，收集上清液。
3. 将 Ni-NTAAgarose 充填柱子，并连接于 Pharmarcia 低压液相层析系统，用 5 倍柱体积的裂解液 2 平衡 Ni-NTAAgarose，调节 A280 值至零线。
4. 将适量上清液上样到 Ni-NTAAgarose 柱子中， 并用 lysis buffer 冲洗至 A280 值低于 0.01。
5. 分别用 5 ～ 10 倍柱体积的清洗液 1 和清洗液 2（Washbuffer 1 and 2）清洗柱 子，直至 A280 值低于 0.01。
6. 用洗脱液（Elution buffer）洗脱重组蛋白质， 在 A280 值监测下，收集出现峰 线后含有重组蛋白的所有洗脱液。
表达载体在基因工程有以下几种元件：
（1）选择标志的编码序列；
（2）可控转录的启动子；
（3）转录调控序列(转录终止子，核糖体结合位点)；
（4）一个多限制酶切位点接头；
（5）宿主体内自主复制的序列。
重组蛋白质的诱导表达：
1. 挑取转化有质粒的单菌落， 接种于 3ml 选择性 LB 液体培养基中， 37 oC，250 rpm/min 振摇培养过夜。
2. 次日将培养过夜的菌液 500 μl 再接种于 10ml（1:20）选择性 LB 液体培养基 中， 37 oC，250 rpm/min 振摇培养至光密度（OD600=0.6）时，取 1 ml 样本作 为诱导前标本， 10000g 离心 1min 收集菌体沉淀，－20 oC 冻存备用。
3. 加入 1 mol/L IPTG 于菌液中，使 IPTG 终浓度为 1 mM ，37 oC ，250 rpm/min 振摇培养 4 ～ 5 小时。取 1 ml 样本作为诱导后标本，同上法收集菌体沉淀， -20 oC 冻存备用。
4. 将诱导前后菌体沉淀用 20 ~ 40 μl PBS（pH= 8.0）重悬， 加入等体积的 2×SDS 上样缓冲液， 煮沸加热 5min，SDS 聚凝胶（SDS-PAGE）电泳分离 ， 考马斯亮蓝染色 3 小时后，脱色观察结果。
5. 选取诱导成功的细菌克隆，扩大诱导规模，收集菌体沉淀，于－ 20 oC 保存，准备做下一步分析及纯化。
公司出售的相关产品：
| 辣根过氧化物酶标记的兔抗人IgG H&L | 髓鞘碱性蛋白/磷脂碱性蛋白抗体 |
| PE-Cy5.5标记的鼠抗人IgG H&L单克隆抗体 | 磷酸化沉默调节蛋白1抗体 |
| 碱性磷酸酶（AP）标记的兔抗亲和素 | 蛋白激酶C结合蛋白1抗体 |
| PE-CY5标记的兔抗生物素抗体IgG H&L | 血影蛋白A链红细胞型抗体 |
| Alexa Fluor 350标记的兔抗亲和素 | 磷酸化活化复制因子2抗体 |
| Cy7标记的兔抗豚鼠IgM | 6号染色体开放阅读框52抗体 |
| 生物素标记的羊抗小鼠IgM | FAPP2蛋白抗体 |
| 生物素标记的(ab)2片段羊抗小鼠IgG H&L | 泛素样蛋白SUMO1激活酶抗体 |
| PE-CY5标记的羊抗兔IgG H&L | Ermin蛋白抗体 |
| Cy5标记的小鼠抗豚鼠IgG H&L | 甲基化组蛋白H3(di methyl K36)单克隆抗体 |
| PE-CY5标记的兔抗亲和素 | 异质核核糖核蛋白D样蛋白抗体 |
| Cy5.5标记的兔抗牛IgG H&L | 组蛋白赖氨酸N-甲基转移酶3C抗体 |
| 辣根过氧化物酶标记的兔抗猴IgG H&L | Recombinant Human CCL7/MCP-3, N-His神经元特异性烯醇化酶/γ 烯醇化酶抗体 |
| 花生四烯酸-5-脂加氧酶(5-LO)重组蛋白 | 肝细胞核因子4α抗体 |
| Cy5标记的兔抗鸡IgM | 热休克蛋白-70抗体 |
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Recombinant Human CCL7/MCP-3, N-His
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