Phi29 DNA Polymerase，EnzymoPur

Phi29 DNA Polymerase是从Bacillus subtilis噬菌体phi29中克隆出的DNA聚合酶， 利用基因重组技术，由大肠杆菌表达。本产品具有高效的DNA连续合成能力及链置换 能力，同时具有3'→5'外切酶校读功能，保真度高。本产品可应用于需要强置换和连续 合成的复制反应及中温条件下高保真度复制，如质粒复制、全基因组扩增等。 

活性定义：

在30℃，10分钟内，将0.5 pmol的脱氧核苷酸掺入酸不溶性沉淀物所需的酶量定义 为 1个活性单位（U）。 

热失活: 

65℃温育10 min即可失活。

质量控制：

 经过多次柱纯化，SDS-PAGE检测其纯度大于95%；经检测无核酸内切酶活性， 无宿主残留DNA。 该酶缓冲液中含有还原剂DTT以便保证其最大酶活性，如果缓冲液不新鲜或经过 反复冻融，使用前应添加4 mM的DTT。

应用实例：

利用Phi29 DNA聚合酶的特殊链置换和连续合成特性，可以大大简化用于测序的环 状质粒制备过程。从细菌培养液中扩增质粒：取1 µl对数中后期新鲜培养物用于以下反应。从平板菌落中扩增质粒：挑取琼脂板上的菌落至10 µl（可变）的双蒸水中，混匀， 取1 µl用于以下反应。扩增已纯化的环状质粒：质粒稀释至1 µg/ml，取1 µl用于以下反应。 

1．样品加热变性及引物与质粒退火反应：加入以下组分，震荡混匀并短暂离心后，95℃ 加热3 min，然后置于冰上15 min。 

2．扩增反应：在上述反应液中加入以下成分，震荡混匀并短暂离心后，30℃温育过夜。

3．65℃加热10 min，热失活Phi29 DNA Polymerase，终止反应。 

4．扩增产物经稀释或纯化后即可用于测序。