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- 保存条件:
2-8°C储存;避光
- 英文名:
Lipo2000 Transfection Reagent
- 库存:
现货
- 供应商:
上海阿拉丁生化科技股份有限公司
- 规格:
L266177-1.5ml/L266177-0.75ml
| 规格: | L266177-1.5ml | 产品价格: | ¥4872.9 |
|---|---|---|---|
| 规格: | L266177-0.75ml | 产品价格: | ¥2471.9 |
产品说明
Lipo2000转染效率介于Lip2000和Lip3000之间,毒性更低,转染效率更高,是一种新型的阳离子脂质体转染试剂。适合于将核酸(DNA和RNA)转染入真核细胞,具有低细胞毒性;对多种类型的细胞和培养板都具有高转染效率;转染时血清的存在不影响转染效率的优点。
适用范围:贴壁细胞和悬浮细胞(哺乳动物细胞系)的转染。
质粒DNA的转染
对大多数细胞来说,DNA(µg)与Lipo2000 (µl)的比例为1:2~1:3。转染时高的细胞密度可以得到高的转染效率和表达水平,并能减少细胞毒性。
1. 以24孔板为例
贴壁细胞: 转染前一天,用500 µl不含抗生素的培养基接种0.5~2×10^5细胞,使之第二天能达到70-90%汇合。
悬浮细胞:在准备DNA-Lip2000复合物之前,用500 µl不含抗生素的培养基接种4~8×10^5细胞即可。
2. 对每个转染样品,进行以下操作
a. 在eppendorf管里分别加入50 µl Opti-MEM I ReLipced Serum Medium和0.8 µg DNA轻柔混匀,制成DNA稀释液。
b. 在另一个eppendorf管里分别加入50µl Opti-MEMI ReLipced Serum Medium和2.0 µl Lipo2000(注意用前先混匀),轻柔混匀,制成Lip2000 稀释液,室温静置5分钟。
c. 将DNA稀释液和Lip2000稀释液混合,轻柔混匀,室温静置20分钟, 形成DNA-Lip2000复合物。DNA-Lip2000复合物在室温下可稳定存在6小时。
3. 将DNA-Lip2000复合物加入到接种好的细胞中,将培养板轻轻地前后摇动,使复合物分散均匀。
4. 在37℃ CO2培养箱中培养4-6小时后更换培养基,继续培养18~48小时。
5. 如果要筛选稳定细胞株,则在转染24小时后将细胞按照1:10或更高的比例接种到新鲜培养基中,第二天加入选择性培养基进行筛选。
质粒DNA转染的优化 为达到最高的转染效率和降低细胞毒性的影响,可以对DNA和Lip2000的比例以及细胞密度进行优化,一般在1:0.5~1:5的范围内优化DNA (µg)和Lip2000 (µl) 的比例。
常见细胞的转染效率(仅供参考,实验条件不同转染效率会有差别)
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文献和实验lipo2000是各大实验室,科学院,技术实验室最常用的转染试剂,小小的试剂,价格不菲,经常听到客户说严格按照说明书来操作,还会出现这样或者那样的问题。客户经常抱怨东西贵,还做不出好效果。 1. Lipo2000的保存:4℃保存和运输 2. Lipo2000的活性:由于Lipo2000是生物蛋白,在4℃保存和运输,所以就算是同 一个批号的Lipo2000,只有在刚出厂分装时活性才是相同的。经过供应商的保存、 运输(运输的温度控制各不相同),其活性将有细微
wywdxfsh 经常看见文献里提到这2个单词,我没搞明白,举个例子,比如我用lipo2000转染一个质粒,在设对照的时候,一个孔只加Lipo2000,一个空什么也没加,那这两个空分别叫什么呢?先谢过走过路过的xdjm,更谢谢留言回复的同志!:) freecell NC: non-specific control,非特异性对照 ,例如你的问题中的“只加Lipo2000”,以探讨某种效应是否由转染试剂影响的。 mock
wzdalxl1314 请教 瞬时转染miRNA的寡聚核苷酸到血管平滑肌细胞中用什么转染试剂好? 请大家帮帮忙,谢谢。 wzdalxl1314 大家的miRNA序列都是哪里设计的 ?是上海吉玛公司的吗? ameng2011 我们实验室做脐动脉的平滑肌是用lipo2000 英骏公司的 本文由丁香园论坛提供,想了解更多有用的、有意思的前沿资讯以及酷炫的实验
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