单组份TMB 膜底物，阿拉丁

免疫印迹实验相关原理介绍

晾干备用。 抗原检测 免疫印迹膜上非特异性蛋白质结合位点的封闭： 转好的膜先用 TBST 润洗两次，每次五分钟。低速水平摇床，常温。 用 5% 的脱脂牛奶（TBST 配制）常温封闭一至两小时。封闭过程应在常温下置于转速较低的水平摇床。 抗体与抗原特异性结合：一抗孵育 9-11.用 TBST 洗膜三次，每次十分钟。 常温下用二抗孵育一到两个小时。 13-15. 用 TBST 洗膜三次，每次十分钟。 准备 ECL 底物，对 8×5 cm 的膜，2 毫升（1 毫升 A 加1 毫升 B）足够

碱性磷酸单酯酶的分离、纯化实验

本实验作为“大肠杆菌碱性磷酸单脂酶基因克隆、表达”的下游实验，通过对重组基因表达后的基因蛋白碱性磷酸单酯酶的提取、分离与纯化的实验操作，了解所涉及的生化技术中提取（细胞破碎）、分离（离心、盐析、过滤等）、复性（包涵体）、层析（凝胶与离子交换层析）、浓缩，与酶蛋白含量和酶活力检测、电泳鉴定及其相关的生物制备与分析的系列操作技术，并结合上游基因克隆与表达的实验操作，使学习与掌握运用这些生化技术制备生化物质的整个过程，以形成现代生物工程技术实际运用

WB 为何又翻车？

① 膜封闭时间不够，室温下通常摇床孵育膜 1h，出现这种情况可以更换合适的封闭液或者适当延长封闭的时间； ② 抗原抗体免疫过程中一抗稀释度太高，可以多设置几组一抗浓度，摸索最适宜的抗体稀释度； ③ 在整个实验过程中膜发生干燥或手套反复接触过也会发生背景值高的情况，因此实验过程中要注意保持膜的湿润，使用镊子夹取膜。 3、WB 结果中有杂带干扰 ① 抗体纯度不高会产生非特异性条带影响结果，高纯度抗体条带特异性更好，建议更换抗体； ② 一抗浓度过高，降低一抗稀释比，目的条带和杂带可能会减弱